[發明專利]一種檢測胃癌遺傳風險的試劑盒

無效

• 申請號: 201210126700.6
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN103374620A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 李為為;姜麗
• 申請（專利權）人: 解碼(上海)生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

?本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體涉及一種胃癌的基因檢測試劑盒，根據檢測結果從基因層面評估人群胃癌發生的風險級別，并且指導胃癌高危人群提早預防和治療。

背景技術

全球每年新發胃癌100余萬，中國占42%，死亡約80萬，中國占35%，是胃癌發病率和死亡率最高的國家之一，發病率和死亡率均是世界平均水平兩倍多。陳萬青等2011年在《中國腫瘤登記地區2007年腫瘤發病和死亡分析》中指出：?2007年，在我國前10位癌癥中，（1）胃癌發病率為第二位，死亡率為第三位；（2）發病率和死亡率的男女之比均為2比1；（3）農村的發病率是城市的1.6倍、農村的死亡率是城市的1.9倍；（4）死亡/發病比率（相當于患病后的病死風險）為第八位。

目前,?胃癌尚缺乏敏感度高、特異性強的早期診斷指標。隨著分子遺傳學和分子生物學的不斷發展以及基因工程技術的不斷進步,?基因的診斷和治療已逐步成為一種新的腫瘤診斷和治療手段。近年來,?胃癌的基因診斷和基因治療在基礎研究方面已經取得了較明顯的進展。應用基因技術檢測腫瘤標志物對胃癌的早期發現、胃癌患者的預后監測、療效判斷等都具有較大的臨床使用價值和意義。

谷胱甘肽轉移酶基因(GSTM1基因)介導谷胱甘肽的解毒作用。GSTM1整個基因缺失，無法介導谷胱甘肽的解毒作用，致癌物在體內累積，增加胃癌的發病風險。早在2000年，劉屹等的研究結果顯示：GSTM1基因缺失多態與胃癌發病相關?,該基因缺失可作為胃癌的宿主易感性標志之一。?葛艷麗等2008年研究了GSTM1基因缺失多態與胃癌發病的相關性。對48例胃癌組及35例胃炎組患者進行hMSH2的表達及GSTM1基因檢測。結果:胃癌組hMSH2蛋白陽性表達率(79.17%)明顯高于胃炎組(37.14%)(P<0.05)。胃癌組GSTM1基因缺失率為72.91%,明顯高于胃炎組缺失率51.42%(P<0.05)。研究結論:hMSH2蛋白異常表達及GSTM1基因缺失可能參與胃癌的發生機制。

亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因是葉酸代謝中的關鍵基因之一，可將還原型葉酸轉變為5-甲基四氫葉酸,?從而削弱5-Fu的抗腫瘤作用。MTHFR?基因多態性與葉酸的濃度及其在細胞內的分布有關,?進而影響腫瘤細胞的生長以及對化療的敏感性。

目前已發現的MTHFR基因的SNPs位點中,C677T和A1298C是兩種最常見與MTHFR活性相關的SNPs。我國學者探討了MTFHR?基因C677T?SNP與中國北方地區人群中食管鱗癌及賁門腺癌危險性的關聯,證實MTFHR基因677?T/T?型者更易患賁門腺癌及食管鱗癌。近年來有多篇文獻報道MTFHR?C677T?多態性與胃癌患者應用氟尿嘧啶類化療的敏感性及預后相關。

黃朝暉等2008年研究結果表明,?MTHFR?C677T?基因多態與胃癌患者對5-Fu為基礎輔助化療后的預后有關,?有可能作為5-Fu對胃癌輔助化療效果的獨立預測指標,?用于指導該類藥物的個體化使用,?以提高臨床治療的針對性和可預見性。

TNF-β和TNF-α基因參與免疫應答、炎癥誘導、細胞信號轉導、細胞凋亡等一系列活動。錯配修復堿基酶分子1(?hMLH1)參與修復DNA復制過程中的錯配，保持DNA遺傳的穩定性與完整性。

同樣的原理，TNF-β基因上A252G、TNF-α基因上G-308A和hMLH1基因上T1151A的單核苷酸多態性位點基因型可以作為胃癌發病的獨立危險因素進行基因檢測。

因此，建立簡單、快速的胃癌易感基因無創檢測方法，能夠檢測出人群胃癌發生相關的基因缺失多態和單核苷酸位點基因型，及時篩查出易患胃癌的高危人群，有針對性的進行健康指導，對于保障人群安全健康、降低胃癌疾病的發生具有非常重要的意義。

發明內容

基于MTHFR基因上C677T、TNF-β基因上A252G、TNF-α基因上G-308A、hMLH1基因上T1151A的4個單核苷酸多態性位點基因型可用來評估胃癌發病風險級別，本發明提供一種胃癌基因無創檢測試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測MTHFR基因上C677T、TNF-β基因上A252G、TNF-α基因上G-308A、hMLH1基因上T1151A的4個單核苷酸多態性位點基因型的特異性引物對及DNA測序引物；

PCR反應組件（包括Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、ddH2O等）；

PCR產物純化組件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；