[發明專利]一株通過發酵甘草提高甘草次酸含量的內生真菌

有效

• 申請號: 201210126265.7
• 申請日: 2012-04-26
• 公開（公告）號: CN102643755B
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 鄭春英;孫雅北;白長勝;孔德崴;譚佳音
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/82
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 金永煥

技術領域

本發明涉及一株內生真菌。

背景技術

甘草為豆科(Leguminosae)甘草屬(Glycyrrhiza?Linn)屬烏拉爾甘草(G.uralensis?Fisch)， 脹果甘草(G.inflate?Bat)和光果甘草(G.glabra?L)的干燥根和根莖，廣泛分布于我國東北、西 北及華北等地。甘草性味甘平，為補氣類中藥，具有補中益氣、清熱解毒、潤肺止咳、緩 急止痛、調和藥性等功效。中醫處方離不開甘草，自古至今，廣為藥用，兼有“國老”的 尊號。近年來，野生甘草因過度采挖強度而瀕臨滅絕，甘草已被列入《野生藥材資源保護 條例》的國家二級保護植物。

甘草的主要成分為甘草次酸，具有防癌、抑癌的作用，是醫藥、化妝品、食品的生產 原料。甘草次酸的來源主要有兩個途徑：一是化學合成，二是從甘草中提取。上述兩種途 徑均需要利用甘草資源，因此如何高效利用甘草資源是人們的研究熱點。

發明內容

本發明提供了一株通過發酵甘草提高甘草次酸含量的內生真菌。

本發明通過發酵甘草提高甘草次酸含量的內生真菌，它為產黃青霉(Penicillium? chrysogenum)RE11，已在中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC?No：M 2012047，保藏地址為武漢市武漢大學，保藏日期為2012年2月29日；它在PDA固體培 養基上培養7d后，菌落直徑為6～8cm，菌落為綠色，基質為黃色，菌絲較密集，菌落邊 緣整齊，緊貼培養基，產分生孢子，分生孢子頭呈圓柱狀，分生孢子單生，單細胞。

本發明通過發酵甘草提高甘草次酸含量的內生真菌，它為產黃青霉(Penicillium? chrysogenum)RE11，其ITS序列提交至NCBI網頁，通過Blast搜索與所得到的序列相似 性高的序列，并通過MEGA5.03軟件構建系統進化樹，RE11菌株的ITS序列與青霉屬菌 (Penicillium?chrysogenum，編號GQ161752.1)菌株的相似性都達到了99％以上，結合形態學 觀察結果，確定內生真菌RE11為產黃青霉(Penicillium?chrysogenum)。

本發明通過發酵甘草提高甘草次酸含量的內生真菌，它為產黃青霉(Penicillium? chrysogenum)RE11，已在中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC?No：M 2012047，保藏地址為武漢市武漢大學，保藏日期為2012年2月29日。

本發明利用微生物制藥手段提取分離甘草健康植株的內生真菌RE11，以其發酵甘草， 以HPLC法為分析手段測定經甘草內生真菌RE11發酵甘草后甘草次酸的含量，結果甘草 發酵后甘草次酸含量顯著高于生藥。將獲得的內生真菌RE11菌株通過形態學觀察和18S rDNA序列分析鑒定其種屬。

本發明通過發酵甘草提高甘草次酸含量的內生真菌，它為產黃青霉(Penicillium? chrysogenum)RE11，能夠以甘草為底物對其進行發酵可使甘草中的甘草次酸含量顯著升 高；甘草次酸是經典的抗炎藥物目前在醫藥化妝品等領域中廣泛應用，還具有防癌和抗癌 作用；本發明對采用甘草內生真菌RE11發酵甘草生產甘草次酸具有指導意義。

附圖說明

圖1為具體實施方式一中產黃青霉(Penicillium?chrysogenum)RE11的孢子顯微結構 圖；

圖2為具體實施方式一中產黃青霉(Penicillium?chrysogenum)RE11的PCR擴增的 電泳圖，其中M泳道表示Marker，1泳道表示RE11；

圖3為具體實施方式一中產黃青霉(Penicillium?chrysogenum)RE11的系統進化樹 圖；

圖4為具體實施方式一中甘草次酸對照品的HPLC色譜圖，其中1表示甘草次酸；

圖5為具體實施方式一中甘草的HPLC色譜圖，其中1表示甘草次酸；

圖6為具體實施方式一中甘草加入對照品后甘草次酸的HPLC色譜圖，其中1表示 加對照品后甘草次酸；

圖7為具體實施方式一中RE11發酵甘草后甘草次酸的HPLC色譜圖，其中1表示 甘草次酸。

具體實施方式