[發(fā)明專(zhuān)利]一株通過(guò)發(fā)酵法提高北五味子主要活性成分含量的內(nèi)生真菌

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210126169.2
• 申請(qǐng)日: 2012-04-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102660466A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭春英;劉玉潔;陸欣媛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 黑龍江大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/14
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/14;C12R1/66
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 金永煥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株內(nèi)生真菌。

背景技術(shù)

北五味子[Schisandra?chinensis(Turcz.)Baill.]，木蘭科植物五味子的干燥成熟果實(shí)，是既食又藥功能性保健食品。北五味子的活性成分是以五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素等為代表的木脂素類(lèi)成分，該類(lèi)成分具有明顯的抗癌、抗炎、鎮(zhèn)靜，抗焦慮，保護(hù)肝細(xì)胞，抗化學(xué)性肝損傷、抗菌等作用，現(xiàn)廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和食品行業(yè)。由于北五味子需求量上漲，森林面積逐漸減少以及盲目的采挖，使北五味子資源面臨考驗(yàn)，目前北五味子是國(guó)家三級(jí)重點(diǎn)保護(hù)的瀕危藥用植物。

發(fā)酵技術(shù)可以改變或增強(qiáng)食品的某些活性，保護(hù)食品中某些活性成分，節(jié)省資源，為食品、藥品活性成分的獲得提供新方法。關(guān)于北五味子發(fā)酵的相關(guān)研究目前未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一株通過(guò)發(fā)酵法提高北五味子主要活性成分含量的內(nèi)生真菌。

本發(fā)明通過(guò)發(fā)酵法提高北五味子主要活性成分含量的內(nèi)生真菌，它為帚狀曲霉(Aspergillus?penicillioides)WT4，已在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號(hào)為CCTCC?No：M2012043，保藏地址為武漢市武漢大學(xué)，保藏日期為2012年2月29日；它在PDA固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天后，菌絲質(zhì)地絲絨狀，具大量的分生孢子結(jié)構(gòu)，暗綠色，邊緣白色，無(wú)滲出液，有輕霉味，菌落反面呈不同程度的微黃到暗綠色，菌株分生孢子頭呈疏松的圓柱狀，分生孢子梗細(xì)長(zhǎng)、頂囊燒瓶形，少數(shù)頂囊近棒形，分生孢子成熟時(shí)球形或近球形。

本發(fā)明中通過(guò)發(fā)酵法提高北五味子主要活性成分含量的內(nèi)生真菌，它為帚狀曲霉(Aspergillus?penicillioides)WT4，依據(jù)《真菌分類(lèi)學(xué)》、《真菌鑒定手冊(cè)》和《半知菌屬圖解》，可見(jiàn)WT4菌株的菌落特征和孢子形態(tài)與曲霉菌特征極為相近。

本發(fā)明中通過(guò)發(fā)酵法提高北五味子主要活性成分含量的內(nèi)生真菌，它為帚狀曲霉(Aspergillus?penicillioides)WT4，其ITS序列提交至NCBI網(wǎng)頁(yè)，通過(guò)Blast搜索與所得到的序列相似性高的序列，并通過(guò)MEGA5.03軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，WJ1菌株的ITS序列與曲霉屬菌株的相似性達(dá)到了98％以上，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果，確定WT4菌株為帚狀曲霉(Aspergillus?penicillioides)。

本發(fā)明通過(guò)發(fā)酵法提高北五味子主要活性成分含量的內(nèi)生真菌，它為帚狀曲霉(Aspergillus?penicillioides)WT4，已在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號(hào)為CCTCC?No：M2012043，保藏地址為武漢市武漢大學(xué)，保藏日期為2012年2月29日。

本發(fā)明采用北五味子為底物，以北五味子內(nèi)生真菌WT4發(fā)酵北五味子，旨在提高北五味子中4種主要木脂素成分含量，為高效利用北五味子，節(jié)省藥源、為天然藥物的研發(fā)和利用提供一條有利的途徑，也為保護(hù)瀕危藥用植物提供切實(shí)的解決辦法。

以五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素4種北五味子主要活性成分作對(duì)照品，運(yùn)用HPLC法測(cè)定北五味子經(jīng)內(nèi)生真菌WT4發(fā)酵前后其有效成分的動(dòng)態(tài)變化，最后通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察和18S?rDNA序列分析鑒定其種屬。

本發(fā)明中帚狀曲霉(Aspergillus?penicillioides)WT4，它能使北五味子中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素等主要活性成分顯著提高，因此在以獲得五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素為目的的原料生產(chǎn)中可以選擇北五味子內(nèi)生真菌WT4發(fā)酵北五味子以提高得率，節(jié)省藥源。

附圖說(shuō)明

圖1為具體實(shí)施方式一中帚狀曲霉(Aspergillus?penicillioides)WT4的菌落形態(tài)圖；

圖2為具體實(shí)施方式一中帚狀曲霉(Aspergillus?penicillioides)WT4的PCR擴(kuò)增的電泳圖，其中M泳道表示Marker，WJ1泳道表示W(wǎng)T4；

圖3為具體實(shí)施方式一中帚狀曲霉(Aspergillus?penicillioides)WT4的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)圖；

圖4為具體實(shí)施方式一中混合對(duì)照品的HPLC色譜圖，其中1表示五味子醇甲，2表示五味子酯甲，3表示五味子甲素和4表示五味子乙素；

圖5為具體實(shí)施方式一中北五味子的HPLC色譜圖，其中1表示五味子醇甲，2表示五味子酯甲，3表示五味子甲素和4表示五味子乙素；