[發(fā)明專利]一種靈菌紅素高產(chǎn)菌株及其生產(chǎn)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210125852.4
• 申請日: 2012-09-03
• 公開（公告）號: CN102888351A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周林;朱爽
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東藥學(xué)院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/16;C12R1/43
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛(wèi);郝文婷

1.一種靈菌紅素高產(chǎn)菌株，名稱為Serratia?marcescens?zl3，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO:M?201209，保藏日期為2012年4月4日，保藏地點為中國.武漢.武漢大學(xué)。

2.權(quán)利要求1所述靈菌紅素高產(chǎn)菌株的生產(chǎn)方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）取5?mL污水接種于45?mL含苯酚富集培養(yǎng)基中，30℃、130?r/min培養(yǎng)72?h。

3.取經(jīng)過馴化的菌液各1mL涂布在含苯酚的無機鹽培養(yǎng)基平板上30℃培養(yǎng)72?h，苯酚終濃度分別為100?mg/L,?300?mg/L,?500?mg/L,?700?mg/L,?1000?mg/L。

4.挑取生長情況良好的菌落在富集培養(yǎng)基平板上劃線分離，30℃培養(yǎng)72?h，在含苯酚1000?mg/L的無機鹽培養(yǎng)基上進(jìn)一步培養(yǎng)篩選能產(chǎn)生紅色素的菌落；

所述富集培養(yǎng)基(g/L)?的組分為：胰蛋白胨10、酵母浸出物5、NaCl?7.5、苯酚100?mg?、pH?7.?0；

所述無機鹽培養(yǎng)基(g/L)的組分為:?硝酸銨1、磷酸二氫鈉?0.?5、磷酸氫二鉀?0.?5、硫酸鎂?0.2、氯化鈣?0.1、氯化鈉0.2、pH?7.0；

相應(yīng)的固體培養(yǎng)基加入2%的瓊脂粉，含苯酚培養(yǎng)基則加入苯酚；

（2）在富集培養(yǎng)基上培養(yǎng)24~72?h并觀察劃線平板，部分菌落由起初的淡紅色逐漸變?yōu)轷r紅色，且菌落表面光滑，呈粘稠狀。

5.挑取生長情況良好的菌落，用無菌的生理鹽水稀釋后，涂布于含苯酚1000?mg/L的無機鹽培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24~72?h并挑取生長情況良好的紅色菌落，即為靈菌紅素高產(chǎn)菌株。

6.權(quán)利要求1所述靈菌紅素高產(chǎn)菌株生產(chǎn)靈菌紅素的方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）一級搖瓶培養(yǎng)（250?mL三角瓶）：蔗糖19?g/L、蛋白胨10?g/L、氯化鈉3?g/L、硫酸鎂2.4?g/L、裝液量50?mL，搖速130?r/min，pH為6，30℃培養(yǎng)20-24?h；

（2）二級搖瓶培養(yǎng)（2?L三角瓶）：1%-5%花生粉培養(yǎng)基，裝液量50?mL，搖速130?r/min，pH為6，30℃培養(yǎng)20-24?h；

（3）三級發(fā)酵培養(yǎng)（50?L發(fā)酵罐）：1%-5%花生粉培養(yǎng)基，裝料系數(shù)0.6，攪拌轉(zhuǎn)速200?r/min，溶氧20%-40%，pH為6，5%接種量，25-30℃培養(yǎng)30-40?h。

7.靈菌紅素的產(chǎn)量達(dá)6-8?g/L；

（4）純化方法：發(fā)酵液離心后收集菌體，按濕菌體質(zhì)量的5-20倍加入酸性無水乙醇，攪拌提取，提取液經(jīng)0.5?μm濾膜過濾后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到色素粗品，回收溶劑，色素粗品用乙醇復(fù)溶，用石油醚：乙酸乙酯=?1：1-10:1進(jìn)行硅膠柱層析洗脫，收集橙色組分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后用乙醇復(fù)溶，經(jīng)Sephadex?LH-20柱層析進(jìn)一步純化，收集535?nm洗脫峰，濃縮后干燥獲得純度>98%靈菌紅素產(chǎn)品。