[發明專利]一種NADH-Q還原酶酶活性檢測方法和試劑

無效

• 申請號: 201210125655.2
• 申請日: 2012-04-26
• 公開（公告）號: CN103374597A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 安祺
• 申請（專利權）人: 北京和信非凡生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種NADH-Q還原酶活性測定方法，其特征在于它的原理如下：

NADH-Q還原酶在特定條件下能夠將NADH中的電子轉移給氧化型輔酶Q（CoQ）生成還原型CoQ，還原型CoQ進一步將電子轉移給電子受體R生成還原型的R；還原型的R在特定的激發波長下可以發射出特異波長的熒光，因此在特定的條件下可檢測到還原型R的熒光值，由于NADH-Q還原酶催化底物反應的速率與還原型R的生產量成正比，因此檢測在特定波長下的還原型R的熒光值的變化，就可以計算出NADH-Q還原酶的酶活力。

2.如權利要求書1所述的電子受體R，其特征在于：它是一種在物理和化學領域普遍被接受的任何能在氧化還原反應中被還原的熒光染料分子，氧化型R被NADH-Q還原酶還原后產生還原型的熒光分子R，還原型熒光分子R可以在特定激發光下發射熒光。

3.如權利要求書1-2所述的電子受體R，其特征在于，它是刃天青（Resazurin），它的結構式為：

一種NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：它是根據權利要求書1所述的原理和方法來開發配制的，它主要用于NADH-Q還原酶的酶活性的分析和檢測。

4.如權利要求書4所述的NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：其主要成分包括如權利要求書1-3所述的電子受體R，這種檢測試劑主要用于NADH-Q還原酶的酶活性的分析和檢測。

5.如權利要求書4-5所述的NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：其主要成分還可以包括電子供體NADH；而且還可以包括如權利要求書1所述的輔酶Q（CoQ），即ubiquinone，它可以是輔酶Q的母體分子，也可以是CoQ母體分子的各種衍生物或修飾物，如CoQ1、CoQ2、CoQ10、Decylubiquinone?等醌類化合物。

6.如權利要求書4-6所述的NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：其成分中還可以包括抑制劑，這種抑制劑是在酶學上普遍被接受的各種能夠抑制NADH-Q還原酶酶活力的試劑或分子。

7.如權利要求書4-6所述的NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于其成分還可以包括緩沖液和穩定劑，所述的穩定劑是被物理、化學和酶學上普遍接受和使用的各種表面活性劑；所述的緩沖液中的緩沖試劑是被物理、化學和酶學上普遍接受的能將體系的pH值緩沖或穩定5.0—9.0的范圍中的試劑。

8.一種NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：它是基于權利要求書1-8所述的原理、方法和試劑的基礎上開發配制的，其主要成分包括：

???如權利要求書8所述的緩沖液???????????????????10—1000mmol/L

???pH范圍?????????????????????????????????????????????5.0—9.0

???如權利要求書8所述的穩定劑??????????????????????0.01%—10%

???如權利要求書6所述的CoQ??????????????????????0.005—2mmol/L

???NADH????????????????????????????????????????0.01—10mmol/L

???如權利要求書7所述的抑制劑??????????????????????0—20mmol/L

???如權利要求書1-3所述的電子受體R??????????????0.002—10mmol/L

這種檢測試劑主要用于NADH-Q還原酶的酶活性分析和檢測。

9.根據權利要求9所述NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：由緩沖液、穩定劑、CoQ、NADH、抑制劑、R組成雙劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩定劑、CoQ、NADH、R組成；試劑2，由抑制劑組成。

10.根據權利要求9所述NADH-Q還原酶活性檢測試劑，其特征在于：由緩沖液、穩定劑、CoQ、NADH、抑制劑、R組成組成三劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩定劑、CoQ、NADH組成；試劑2，由緩沖液、穩定劑、R組成；試劑3，由抑制劑組成。