[發明專利]抗人血清白蛋白單鏈抗體及其碳端連接多肽藥物的方法

有效

• 申請號: 201210125323.4
• 申請日: 2012-04-26
• 公開（公告）號: CN102827277A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 楊艷坤;龍泉;張芃芃;楊冬;劉冰
• 申請（專利權）人: 拜明(蘇州)生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K7/08;C07K19/00;A61K47/48;A61K38/22;A61P3/10
• 代理公司: 蘇州廣正知識產權代理有限公司 32234
• 代理人: 張利強

技術領域

本發明涉及一種單鏈抗體，特別是涉及一種抗人血清白蛋白單鏈抗體及其碳端連接多肽藥物的方法。?

背景技術

目前，以多肽為主的生物藥物在世界范圍內呈現出迅速推廣的態勢。?

多肽類生物藥物藥效顯著，并能夠治療許多化合物類藥品無法見效的遺傳類疾病。但是，多肽類生物藥物在使用中的最大問題之一是此類藥物在人體內的衰減周期一般較短，致使用藥頻率相對較高。給病人帶來較大的治療成本和用藥痛苦。因此，延長多肽類生物藥物的半衰期就成為生物制藥學領域亟待解決的課題。?

目前用于延長多肽類生物藥物半衰期的方法主要有包括構建突變體、PEG修飾以及與大分子蛋白融合等。這些方法都能有效地延長多肽類生物藥物的半衰期，但是也存在一些問題。通過突變體的構建通常可以降低多肽對水解酶的敏感性，有效地延長多肽類生物藥物的半衰期，但是很多半衰期較長的突變體會改變藥物的活性，要獲得一個即能夠滿足半衰期要求，同時又不改變藥物活性的突變體十分困難。因此，該技術不適宜在蛋白藥物領域廣泛推廣應用，PEG化修飾可以在提高蛋白藥物的穩定性的同時降低其免疫原性，但是有影響多肽類生物藥物的生物活性的潛在可能，同時，對經過PEG化處理的多肽類生物藥物進行純化較為困難，增加了生產過程中的難度和生產成本。通過與具有較長半衰期的人體蛋白直接融合是一種切實可行的延長藥物半衰期的有效方法，但是這種融合方式大大增加了多肽類生物藥物的分子量，給生產和純化帶來了很多問題，分子量的增加也會改變藥物的某些藥代動力學特性，可能使其難以達到靶點所在位置，進而影響藥效。?

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種可以有效延長半衰期的單鏈抗體以及使用該單鏈抗體組合形成的藥物組合物。?

本發明的目的之一是提供一種特異性抗人血清白蛋白(HSA)單鏈抗體。?

本發明的目的之二是提供一種含有所述的特異性抗人血清白蛋白(HSA)單鏈抗體與多肽類藥物形成藥物組合物的方法，以及利用這種方法延長藥物半衰期的方法。?

在本發明的第一個目的中提供了一種單鏈抗體的VH鏈區域，它的互補決定區CDR具有選自下組CDR的氨基酸序列：?

CDR1:?C-SEQ-05

CDR2:?C-SEQ-06

CDR3:?C-SEQ-07

所述的單鏈抗體VH鏈區域以C-SEQ-02所示的氨基酸序列為一個較佳的序列。

在本發明的第一個目的中，本發明還提供了一種單鏈抗體的VL鏈區域，它的互補決定區CDR具有選自下組CDR的氨基酸序列：?

CDR1:?C-SEQ-08

CDR2:?C-SEQ-09

CDR3:?C-SEQ-010

所述的單鏈抗體VL鏈區域以C-SEQ-04所示的氨基酸序列為一個較佳的序列。

在本發明的第一個目的中，本發明還提供了一種單鏈抗體。其VL鏈區域具有如權利要求1所指明的互補識別區；其VL鏈區域具有如權利要求3所指明的互補識別區；其VH鏈以C-SEQ-02所示的氨基酸序列為一個較佳的序列。其VH鏈以C-SEQ-04所示的氨基酸序列為一個較佳的序列。其VH鏈區域和VL鏈區域使用如C-SEQ-01所示或C-SEQ-03所示的蛋白連接鉸鏈連接。?

在本發明的第二個目的中提供了一種單鏈抗體與多肽藥物連接形成組合物的連接方法。它使用如C-SEQ-01所示或如C-SEQ-03所示的蛋白連接鉸鏈從單鏈抗體的碳端與多肽類藥物連接。?

在本發明的第二個目的中，本發明還提供了一種通過上述單鏈抗體有效延長生物藥物半衰期的方法。它采用本發明所述的單鏈抗體的碳端和藥物形成組合物。它含有上述與單鏈抗體的氨基酸序列和任意一種多肽類藥物的序列。?

與現有技術相比本發明的有益效果為：本發明中的單鏈抗體它具有分子量小，抗體特異性強，免疫源性弱，水溶性好，易于通過發酵方式大規模生產，產物均一性強等特點，單鏈抗體非常適合與多肽類生物藥物融合，通過菌類發酵整體表達過程大批量生產，人血清白蛋白分子量為150Kda，在人體中的半衰期長達19天，借助其與人源化抗人血清白蛋白單鏈抗體片段所形成的組合物，可有效延長多肽類生物藥物的半衰期，同時，由于單鏈抗體分子量很小，融合表達后的抗體-多肽類生物藥物組合體本身的分子量依然可保持在小于20Kda較低水平。避免了潛在的免疫源性，也降低了生產過程中的難度和生產成本。?

附圖說明

圖1是電泳檢測結果示意圖；?