[發明專利]一種異型雙功能連接劑輔助蛋白質的PEG修飾方法

無效

• 申請號: 201210124158.0
• 申請日: 2012-04-25
• 公開（公告）號: CN103374559A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 胡濤;王俊;蘇志國;馬光輝;劉慎翔
• 申請（專利權）人: 中國科學院過程工程研究所
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種異型雙功能連接劑輔助蛋白質的PEG修飾方法，主要步驟為：向待修飾的蛋白質溶液中加入異型雙功能連接劑；反應完成后，加入羥胺去除巰基保護劑，使巰基暴露；離心除去未反應的異型雙功能連接劑及其它副產物，隨后加入PEG修飾劑，完成蛋白質的PEG修飾。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征：所述異型雙功能連接劑一端的基團與蛋白質的氨基反應，實現與蛋白質的共價結合；與蛋白質共價結合后，它的另一端存在一個暴露的巰基。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征是：所述異型雙功能連接劑為N-琥珀酰亞胺基-S-乙酰硫代乙酸酯(N-Succinimidyl?S-Acetylthioacetate，簡稱SATA)。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征是由以下步驟組成：

步驟1，將待修飾的蛋白質按一定濃度溶于pH?7.0～8.0、20mM的磷酸鈉緩沖液溶液中；

步驟2，蛋白質與異型雙功能連接劑的摩爾比為1∶1～10，按此比例向樣品溶液中加入異型雙功能連接劑，于2～8℃下反應3小時以上；蛋白質與羥胺的摩爾比為1∶10～20，按此比例向樣品溶液中加入羥胺，去除巰基保護劑，獲得暴露的巰基，于2～8℃下反應1小時以上；

步驟3，用超濾管離心或用透析裝置透析除去未反應的異型雙功能連接劑及其它副產物，所使用的超濾管或透析裝置的截留分子量由蛋白質的分子量確定；

步驟4，按蛋白質與PEG的摩爾比例為1∶2～40，向步驟3的樣品溶液中加入PEG，于2～8℃下反應3小時以上，完成PEG和蛋白質的偶聯。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所使用的聚乙二醇為單甲氧基馬來酰亞胺聚乙二醇，分子量為2.0kDa-60.0kDa。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所使用的蛋白質為核糖核酸酶A(RNase?A)。