[發(fā)明專利]鴨促性腺激素釋放激素受體基因(GNRHR)

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210123187.5
• 申請(qǐng)日: 2012-04-25
• 公開（公告）號(hào): CN102660549A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳寬維;朱文奇;李慧芳;陳文峰;束婧婷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇騰達(dá)源農(nóng)牧有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C07K14/72;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種鴨促性腺激素釋放激素受體基因(GNRHR)核苷酸序列及基因編碼的氨基酸序列，屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

我國(guó)是世界上養(yǎng)鴨數(shù)量、產(chǎn)品消費(fèi)和出口貿(mào)易的第一大國(guó)。根據(jù)FAO的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：2006年，我國(guó)鴨存欄量超過7.25億只，占世界總存欄量的69.28％左右，養(yǎng)鴨業(yè)逐步成為我國(guó)經(jīng)濟(jì)結(jié)構(gòu)中的特色產(chǎn)業(yè)和農(nóng)村經(jīng)濟(jì)發(fā)展的支柱產(chǎn)業(yè)之一。但是，關(guān)于鴨分子生物學(xué)研究大大落后于鴨育種和生產(chǎn)的發(fā)展，這些成果取得仍然依靠傳統(tǒng)的育種和生產(chǎn)技術(shù)。

促性腺激素釋放激素受體在動(dòng)物生殖發(fā)育調(diào)控過程中起著關(guān)鍵作用。促性腺激素釋放激素與垂體中的促性腺激素釋放激素受體結(jié)合，能促進(jìn)促黃體素(LH)和促卵泡素(FSH)的合成與釋放，促進(jìn)性腺的生長(zhǎng)、成熟和調(diào)節(jié)動(dòng)物的繁殖功能及行為。Ikemoto.T等(2004)報(bào)道，GNRH經(jīng)過和它的特定受體(GNRHR)的交互作用在動(dòng)物生殖功能活動(dòng)中扮演一個(gè)關(guān)鍵性的角色。Kim等(2003)研究表明，抑制動(dòng)物GNRH及其受體基因的表達(dá)將極大抑制其生殖活動(dòng)。目前，豬、山羊、雞等動(dòng)物的促性腺激素釋放激素受體基因序列已陸續(xù)被報(bào)道，它與初產(chǎn)母豬黃體生成數(shù)(Jiang等，2001)、山羊產(chǎn)羔數(shù)(儲(chǔ)明星等，2009)和母雞產(chǎn)雙黃蛋數(shù)(Dunn等，2004)相關(guān)顯著，該基因是提高動(dòng)物繁殖性能的重要侯選基因。但是鴨促性腺激素釋放激素受體基因還未曾有報(bào)道，極大地制約了鴨分子遺傳育種的研究和生物技術(shù)在鴨生產(chǎn)中的應(yīng)用，影響了養(yǎng)鴨業(yè)地快速發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了利用基因工程技術(shù)加快對(duì)鴨繁殖性能的改良，提供鴨促性腺激素釋放激素受體基因(GNRHR)核苷酸序列、編碼的氨基酸序列以及獲得該基因序列的引物序列。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

鴨促性腺激素釋放激素受體基因(GNRHR)，它經(jīng)由以下兩對(duì)引物：GF4(SEQID?No：14)與GR4(SEQ?ID?No：15)；GF5(SEQID?No：16)與GR5(SEQID?No：17)克隆測(cè)序獲得。鴨促性腺激素釋放激素受體基因，在于核苷酸序列SEQ?IDNo：1所示。所述的鴨促性腺激素釋放激素受體基因及基因編碼的氨基酸序列SEQ?ID?No：2所示。

所述方法包括下列步驟：(1)根據(jù)已知?jiǎng)游颎NRHR基因的序列分析該基因結(jié)構(gòu)和保守區(qū)域；(2)根據(jù)Genebank中雞GNRHR基因的序列(nc_006096.2)和雞chromosome?10(NW_001471429.1)的信息，設(shè)計(jì)一對(duì)位于GNRHR基因第2外顯子上的引物GF1和GR1，GF1的序列如SEQ?ID?No：3，GR1的序列如SEQ?ID?No：4；(3)以鴨基因組DNA為模板，利用引物GF1和GR1擴(kuò)增并克隆測(cè)序得到DG1序列121bp，DG1的序列如SEQ?ID?No：5；(4)序列DG1與雞G?HR基因進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)同源性達(dá)92％，判定該段序列為GNRHR基因上的序列；(5)根據(jù)DG1與雞GNRHR基因序列設(shè)計(jì)兩對(duì)引物GF2、GR2和GF3、GR3，GF2位于GRHR基因的第一外顯子位置，其序列如SEQ?ID?No：6，GR3位于GNRHR基因的第三外顯子位置，其序列如SEQ?ID?No：7，GR2和GF3均位于GNRHR基因的第二外顯子位置，序列分別如SEQ?ID?No：8和SEQ?ID?No：9；(6)以GF2、GR2和GF3、GR3兩對(duì)引物擴(kuò)增鴨基因組DNA，分別克隆測(cè)序得到DG2和DG3序列，DG2和DG3序列分別如SEQ?ID?No：10，SEQ?ID?No：11；(7)DG2和DG3序列分別與雞GNRHR基因比對(duì)，同源性分別達(dá)到89％、88％；(8)根據(jù)DG2序列設(shè)計(jì)上游引物GF4，其序列如SEQ?ID?No：12，根據(jù)DG3序列設(shè)計(jì)一條下游引物GR4，其序列如SEQ?ID?No：13，用于擴(kuò)增鴨GNRHR基因大部分全長(zhǎng)序列；(9)利用引物GF4和GR4擴(kuò)增鴨基因組DNA，克隆測(cè)序獲得鴨GNRHR基因大部分全長(zhǎng)序列DG4，其序列如SEQ?ID?No：14；(10)根據(jù)DG3序列設(shè)計(jì)一條上游引物GF5，其序列如SEQ?ID?No：15，根據(jù)雞GNRHR基因3’UTR區(qū)設(shè)計(jì)一條下游引物GR5，其序列如SEQ?ID?No：16；(11)利用引物GF5和GR5擴(kuò)增鴨基因組DNA，克隆測(cè)序獲得一條鴨GNRHR基因3’UTR區(qū)序列DG5，其序列如SEQ?ID?No：17；(12)通過DNAstar、Bioedit等軟件編輯和拼接，最終獲得GNRHR全長(zhǎng)序列。