[發明專利]口蹄疫病毒多種非結構蛋白抗體斑點印跡檢測試劑盒及方法無效
| 申請號： | 201210122698.5 | 申請日： | 2012-04-25 |
| 公開（公告）號： | CN102662063A | 公開（公告）日： | 2012-09-12 |
| 發明（設計）人： | 盧曾軍;劉在新;付元芳;曹軼梅;孫普;包慧芳;李平花;白興文;陳應理;李冬;謝寶霞;劉湘濤 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蘭州獸醫研究所 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 730046 *** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 口蹄疫病毒 多種 結構 蛋白 抗體 斑點 印跡 檢測 試劑盒 方法 | ||
1.一種口蹄疫病毒多種非結構蛋白抗體斑點印跡檢測試劑盒，其特征在于，包括五種NSP印跡膜條、血清稀釋液、25×濃縮PBST洗滌液、膜顯色底物溶液、100×濃縮酶標檢測抗體、陽性對照血清和陰性對照血清以及20孔血清稀釋板；
所述五種NSP印跡膜條，為真空轉印包被了五種非結構蛋白的聚偏氟乙烯膜，這五種非結構蛋白包括3A、3B、2C表位區、3ABC與3D蛋白；
所述血清稀釋液：含10％馬血清，0.25％酪蛋白，1％海藻糖，0.01％硫柳汞的0.01M磷酸鹽溶液；
所述25×濃縮PBST洗滌液：500mL超純水中加NaCl?200g、KCl?5g、Na2HPO4·12H2O?72.5g、KH2PO4?5g和12.5mL吐溫20，補超純水定容至1000mL，pH為7.4，高壓滅菌，室溫存放備用；
所述膜顯色底物溶液：為單組份膜顯色3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺底物；
所述100×濃縮酶標檢測抗體：為辣根過氧化物酶標記的兔抗牛、羊、豬免疫球蛋白G的抗體，通過將HRP酶標抗體稀釋于抗體保存液中制備；
所述陽性對照血清：采自口蹄疫病毒感染后1～3個月的牛、羊或豬，經檢測，非結構蛋白抗體與結構蛋白抗體均為陽性，經無菌處理后加保存劑制備；
所述陰性對照血清：采自非免疫健康牛、羊和豬，經檢測口蹄疫病毒結構蛋白與非結構蛋白抗體均為陰性，經無菌處理后加保存劑保存。
2.口蹄疫病毒多種非結構蛋白抗體斑點印跡檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
A1、將血清1∶100稀釋于20孔血清稀釋板，1ml血清稀釋液中加血清20μl，放入相應印跡膜片，37℃搖振作用1h；
A2?將膜用1×PBST洗滌液洗膜3次，每次浸泡約1min；
A3?用血清稀釋液稀釋酶標抗體于直徑60mm平皿內，放入反應膜條，37℃搖振作用1h，同前洗滌；
A4?換新的平皿，加入適量膜顯色底物，避光搖振顯色約5～10min；
A5?用去離子水沖洗終止反應，眼觀判定結果；
A6?試驗成立的條件：陽性對照5點顯色，陰性對照沒有顯色；
A7?結果判定：有4或5點顯色的血清為非結構蛋白抗體陽性，沒有斑點顯色或有1～3點顯色判為非結構蛋白抗體陰性。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于中國農業科學院蘭州獸醫研究所，未經中國農業科學院蘭州獸醫研究所許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201210122698.5/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
- 上一篇：壓縮式外熱機的外置吸熱器
- 下一篇：一種淋巴細胞分離液的制備方法
