[發(fā)明專利]貝萊斯芽孢桿菌ZJ20菌株及其液體制劑

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210122696.6
• 申請日: 2012-04-25
• 公開（公告）號: CN102703342A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱天輝;李姝江;梁漫;譙天敏
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的是貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus?velezensis)一新菌株ZJ20及其液體制劑。?

背景技術(shù)

撐×綠雜交竹是中國南西南等地引種發(fā)展的主要經(jīng)濟(jì)竹種之一，在經(jīng)濟(jì)、生態(tài)、社會效益等方面起著巨大作用。而近年來，由半知菌亞門絲孢綱節(jié)菱孢屬的暗孢節(jié)菱孢菌引起的撐×綠雜交竹梢枯病卻成為威脅雜交竹產(chǎn)業(yè)的重要病害之一，嚴(yán)重阻礙了撐×綠雜交竹的發(fā)展，甚至帶來毀滅性的災(zāi)害，大大降低了撐×綠雜交竹的應(yīng)用價值。目前，在林業(yè)生產(chǎn)上對該病的防治大多采用化學(xué)防治，但由于長時期的施用化學(xué)農(nóng)藥不僅會造成病原菌抗藥性的增強，也會給人們的身體健康和生態(tài)環(huán)境帶來嚴(yán)重傷害，因此針對該病害有必要探索生物防治等新的防治途徑，生物防治是生態(tài)學(xué)領(lǐng)域的一個應(yīng)用學(xué)科分支，是基于生態(tài)平衡的原理，引進(jìn)有益生物基因或基因產(chǎn)物，達(dá)到穩(wěn)定、有效地防治靶標(biāo)病(蟲)，生物農(nóng)藥(biopesticides)是利用生物活體或者其代謝產(chǎn)物對有害生物進(jìn)行防治的一類制劑，是生物防治的物質(zhì)基礎(chǔ)和重要手段。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明在雜交竹生態(tài)系中發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus?velezensis)一新菌株ZJ20，不僅能有效控制雜交竹梢枯病，且具有促進(jìn)其生長恢復(fù)的新功能。?

該菌株于2008年6月2日分離自四川省雅安市雨城區(qū)金雞關(guān)雜交竹。該菌株已于2012年4月13日保藏在中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?NO.5995，分類命名為貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus?velezensis)。?

貝萊斯芽孢桿菌菌株ZJ20的液體制劑，制備方法如下：?

①一級斜面種子：常規(guī)方法制作牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，接種貝萊斯芽孢桿菌ZJ20后在26-28℃下培養(yǎng)24-36小時制成一級種子；?

②二級液體種子：改進(jìn)的營養(yǎng)肉質(zhì)培養(yǎng)液經(jīng)高壓滅菌后，按100mL液體盛于300mL三角瓶比例裝瓶，在無菌狀態(tài)接種貝萊斯芽孢桿菌ZJ20斜面種子，每瓶接種2支斜面種子，溫度26-28℃，初始pH值6.5，120r/min振蕩培養(yǎng)36h，制成貝萊斯芽孢桿菌ZJ20液體種子；?

③液體發(fā)酵：改進(jìn)的營養(yǎng)肉質(zhì)培養(yǎng)液經(jīng)高壓滅菌后，按200mL液體盛于500mL三角瓶比例裝瓶，在無菌狀態(tài)接種ZJ20液體種子，接種量10％，溫度26-28℃，初始pH值6.5，120r/min振蕩培養(yǎng)72h，制成ZJ20液體制劑。?

(1)本發(fā)明篩選的生防菌貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus?velezensis)ZJ20新菌株，具有抗逆性強的芽孢，商品貯藏壽命長，對環(huán)境適宜性強，可生產(chǎn)成商品生物制劑；?

(2)代謝產(chǎn)物殺菌力強，在植株上定殖能力強、速度快，能有效占領(lǐng)雜交竹體表，預(yù)防梢枯病的發(fā)生。?

(3)產(chǎn)生的抗菌蛋白(幾丁質(zhì)結(jié)合蛋白質(zhì))不僅可殺滅病菌，且能促進(jìn)雜交竹和多種竹類枝葉生長、有恢復(fù)病后生產(chǎn)能力的新功效。?

具體實施方式

以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。?

(1)貝萊斯芽孢桿菌ZJ20液體制劑的發(fā)酵與應(yīng)用?

①一級斜面種子：常規(guī)方法制作牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基(牛肉膏7.0g，蛋白胨10g，NaCl5g，瓊脂17g，水1000mL)，接種貝萊斯芽孢桿菌ZJ20后在26-28℃下培養(yǎng)24-36小時制成一級種子。?

②二級液體種子：改進(jìn)的營養(yǎng)肉質(zhì)培養(yǎng)液(牛肉膏7.0g，蛋白胨10g，NaCl5g，竹葉浸漬液1000mL)經(jīng)高壓滅菌后，按100mL液體盛于300mL三角瓶比例(通氧控制)裝瓶，在無菌狀態(tài)接種貝萊斯芽孢桿菌ZJ20斜面種子，每瓶接種2支斜面種子，溫度26-28℃，初始pH值6.5，120r/min振蕩培養(yǎng)36h，制成貝萊斯芽孢桿菌ZJ20液體種子。?

③液體發(fā)酵：改進(jìn)的營養(yǎng)肉質(zhì)培養(yǎng)液(牛肉膏7.0g，蛋白胨10g，NaCl5g，竹葉浸漬液1000mL)經(jīng)高壓滅菌后，按200mL液體盛于500mL三角瓶比例(通氧控制)裝瓶，在無菌狀態(tài)接種ZJ20液體種子，接種量10％(體積比)，溫度26-28℃，初始pH值6.5，120r/min振蕩培養(yǎng)72h，制成ZJ20液體制劑。平板法測定ZJ20對雜交竹梢枯病菌(Arthrinium?phaeospermum)抑菌率達(dá)到100％以上。?