[發(fā)明專利]馬鈴果它波寧快速檢測技術(shù)

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210122339.X
• 申請日: 2012-04-24
• 公開（公告）號: CN102706973A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 羅慶林
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶恒星生物技術(shù)有限責(zé)任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及它波寧的檢測技術(shù)，具體涉及一種從馬鈴果種子中檢測它波寧的工藝方法。?

背景技術(shù)

馬鈴果(Voacanga)是一種非洲植物，從其種子中可以分離出一種生物堿，名為它勃寧(tabersonine)，又稱柳葉水甘草堿。研究表明，它勃寧有降血壓、抗腫瘤作用，以及用于中風(fēng)后遺癥、缺血性高血壓腦病、腦血管病引起的抑郁、焦慮不安、情緒不穩(wěn)，適于早衰性腦退化的癥狀消除，如眩暈、頭痛、記憶力減退、注意力不集中、失語、梅尼埃綜合征等，也可用于視網(wǎng)膜出血、神經(jīng)性心動過速和其他植物神經(jīng)功能紊亂等。?

現(xiàn)有技術(shù)中一般采用加熱回流提取技術(shù)檢測馬鈴果中它波寧的含量，包括馬鈴果取樣粉碎、提取、濃縮、結(jié)晶、抽濾、烘干等幾個步驟，此方法取樣階段原料用量通常需要100g左右，原料用量大，步驟較多，檢測時間太長，不利于特定情況下對馬鈴果它波寧的快速檢測要求。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種所耗原料量小，檢測時間短，檢測結(jié)果準(zhǔn)確度高的馬鈴果它波寧快速檢測技術(shù)。?

本發(fā)明的技術(shù)方案：一種馬鈴果它波寧快速檢測技術(shù)，包括以下工藝步驟：?

（1）、取樣及粉碎：多點均勻取樣，將馬鈴果樣品混合均勻后粉碎待用。?

（2）、提取：取粉碎后的馬鈴果樣品3g，加入提取罐中，再加入25ml甲醇，用超聲波提取30分鐘，靜置30分鐘并冷卻至室溫。?

（3）、液相檢測：取步驟（2）中的上清液1ml至10ml容量瓶中，定容至刻度作為供試液；對照液濃度為1mg/ml，分別精密量取對照液和供試液各5ul注入液相色譜儀，記錄峰面積按含量計算公式得出供試液含量。?

步驟（1）中粉碎要求為40目。?

步驟（2）中超聲波提取時間為30分鐘。?

步驟（3）中檢測時的進(jìn)樣量為5ul，流速為1ml/min，檢測波長為245nm，檢測時的流動相為甲醇：乙腈=8:2。?

本發(fā)明的技術(shù)效果：所耗原料量少，所需時間短，檢測結(jié)果準(zhǔn)確度高，相對誤差小。?

以下提供一些實驗數(shù)據(jù)及對比數(shù)據(jù)：?

現(xiàn)有技術(shù)常規(guī)的馬鈴果它波寧檢測方法如下：?

取樣及粉碎：多點均勻取樣，再將樣品混合均勻后粉碎待用。?

提取：精密稱取粉碎好的馬玲果粉末100g置于圓底燒瓶中，再加入500ml溶劑油在60℃下回流提取四次，每次提取2小時。?

濃縮：將四次提取液抽濾后濃縮至無液體流出為止，傾入250ml燒杯中。?

結(jié)晶：將鹽酸和溶劑油按1:5的比例調(diào)配好后，用滴管向裝有濃縮液的燒杯中慢慢加入，邊加邊用玻璃棒快速攪拌，直到晶體析完為止，放置一小會兒。?

抽濾：將有晶體析出的濃縮液抽濾至干，上層為粉末它波寧，下層母液繼續(xù)析晶，直到將它波寧析完為止。?

烘干：將抽濾出的它波寧放烤箱里烘干，并稱重，即得粗品。?

對比實驗：取同一批馬鈴果，混合均勻后，平均分成6份，分別編為A、B、C、D、E、F,其中A、B、C用常規(guī)檢測法檢測，D、E、F用快速檢測法檢測。?

兩種方法的檢測結(jié)果如下表：?

本發(fā)明快速檢測法的驗證性實驗?

（一）、穩(wěn)定性試驗?

1、實驗?zāi)康模簷z測在常溫條件下，溶劑甲醇對它波寧含量的影響。?

2、實驗方法：?

提取：將馬鈴果粉碎，稱取3g，加入提取罐中，再加入25ml甲醇，用超聲波提取30分鐘，靜置并冷卻至室溫（約0.5小時），作為供試品，待取樣。?

液相檢測：取上清液1ml至10ml容量瓶中，定容至刻度作為供試品，對照液濃度為1mg/ml，分別精密量取對照液和供試品各5ul注入液相色譜儀。記錄峰面積按含量計算公式得供試品含量。?

再每隔一個小時取步驟一中的供試品，及1.5h、2.5h、3.5h、4.5h、5.5h分別取樣重復(fù)步驟二的操作。?

3、實驗結(jié)果及結(jié)論?

（1）、實驗結(jié)果如下表?