[發明專利]流感疫苗中的過敏原卵類粘蛋白或卵運鐵蛋白定量檢測

無效

• 申請號: 201210121675.2
• 申請日: 2012-04-24
• 公開（公告）號: CN102650640A
• 公開（公告）日: 2012-08-29
• 發明（設計）人: 張春梅;李琦;宋朝君;金伯泉;李永明;徐竹蔚;陳麗華;楊琨;張赟;方亮;易靜;周幸春;馬櫻;劉蓓;張宇絲;劉志佳
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 李鄭建

1.一種流感疫苗中的過敏原卵類粘蛋白或卵運鐵蛋白定量檢測方法，其特征在于，在制備抗卵類粘蛋白或抗卵運鐵蛋白單克隆抗體的基礎上，經過配對抗體的篩選和建立雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗，來定量檢測卵類粘蛋白或卵運鐵蛋白。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述的抗卵類粘蛋白或抗卵運鐵蛋白的制備方法是：將卵類粘蛋白或卵運鐵蛋白作為免疫原，采用常規雜交瘤技術得到抗卵類粘蛋白或抗卵運鐵蛋白的單克隆抗體；

所述的配對雙抗體的篩選方法是：將得到的抗卵類粘蛋白或抗卵運鐵蛋白單克隆抗體分別常規標記辣根過氧化物酶，分別將未標記的單克隆抗體作為包被抗體，將標記的單克隆抗體作為酶標抗體，采用陣列法兩兩配對，挑選選擇敏感性最高，即檢測相同濃度的卵類粘蛋白或卵運鐵蛋白的光吸收值最高，且特異性高的配對抗體；建立雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗的系統；

所述的雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗的方法是，在96孔板中，加入5mg/L包被抗體，24小時后用含牛血清白蛋白的緩沖液封閉96孔板，洗滌后加入經稀釋的雞胚尿囊液中提取的流感病毒原液標本和倍比稀釋的卵類粘蛋白或卵運鐵蛋白標準品，孵育及洗滌后加入酶標抗體，再次孵育及洗滌后以2，2’-連氮基-雙(3-乙基苯并噻吡咯啉-磺酸)底物顯色，于波長410nm測定光吸收值，以卵類粘蛋白或卵運鐵蛋白標準品的光吸收值為縱坐標，相應濃度為橫坐標，作標準曲線，根據待測標本的光吸收值，經曲線擬合或換算，得出流感疫苗中卵類粘蛋白或卵運鐵蛋白的濃度。