[發明專利]一種檢測新布尼亞病毒抗原的ELISA試劑盒的制備和應用

在審

• 申請號: 201210121521.3
• 申請日: 2012-04-24
• 公開（公告）號: CN102809653A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 萬里明;焦永軍;曾曉燕
• 申請（專利權）人: 萬里明
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.發明領域

本發明屬于生物技術領域免疫診斷范疇。根據靶標分類的不同，目前針對傳染病的診斷可分為分子生物學和免疫學診斷兩類。分子生物學診斷具有快速、檢出限低等優點，但是對于尖端儀器的依賴、易交叉污染以及對操作人員高素質的要求等，限制了其在基層的應用和推廣。免疫學診斷(亦稱血清學診斷)是以抗原抗體之間特異性結合為基礎，如可以通過病原體特異性抗原檢測其抗體，反之亦然。傳統的免疫學診斷方法包括如病毒微量中和、免疫熒光、空斑減少等，但上述實驗均涉及時間過長、需要操作活病毒、只能在高等級實驗室內進行等問題。與上述各類實驗方法相比，基于酶聯免疫吸附試驗ELISA原理開發的診斷試劑，具有敏感性高特異性強、操作簡便、節約時間、價格低廉和適合基層使用等優點，市場的需求量也較大。

2.發明背景

新布尼亞病毒(Novel?Bunyavirus，SFTS?Bunyavirus)，是發熱伴血小板減少綜合癥(Feverwith?Throbocytopenia?Associated?Syndrome，SFTS)的病原，為布尼亞病毒科白熱病毒屬的一種新型病毒，于2009年在中國首先發現，也是中國首例發現的新型病毒。患者出現以高熱、血小板減少、白血球降低、多器官功能紊亂、出血等為特征的嚴重急性傳染病，嚴重影響著人民的健康和生命安全。2010年中國中東部，包括安徽、江蘇、湖北、河南、山東等省先后爆發多起由蜱蟲叮咬而致人死亡公共衛生事件，造成社會恐慌，嚴重影響當地群眾健康安全和經濟發展。到目前為止，國內16個省發現300多病例，造成40余人死亡。經國家疾控中心、相關省疾控中心多家單位的聯合攻關，現已查明引起該傳染病的病原為一新型的出血熱病毒，在分類學上屬于布尼亞病毒科(Bunyaviridae)、白病毒屬(Phlebovirus?genus)，目前命名為發熱伴血小板減少綜合征病毒(Severe?Febrile?and?Thrombocytopenicyndrome?Virus，SFTSV)目前該病毒序列已經闡明，基于RT-PCR的檢測標準已經建立，但是對SFTSV的免疫學檢測試劑還未建立，使得評價該病毒感染缺乏一個對PCR結果的驗證方法。也無法評估群體的既往感染水平以及疫苗的保護作用。

由于該病毒引起的是一新發傳染病，臨床始發癥狀與普通流感無異，且病人多集中在衛生醫療水平薄弱的農村地區；同時基層醫療從業人員缺乏相關鑒別診斷的培訓，當前迫切需要能適應基層臨床檢驗人員操作的、快速檢測方法，便于對病人的及時救治。另外，該病的流行病學特征、傳播媒介、動物感染情況等目前均處于空白狀態，也急需開發操作簡單、方便快捷的檢測試劑，以滿足疾控系統對疫區人群、動物監測工作之需求，而目前市場無相關產品供應。

3.發明內容

本發明的目的之一在于提供了一株新的，用于檢測發熱伴血小板減少綜合征病毒的新布尼亞病毒JS-2007-001，該病毒分類命名為新布尼亞病毒(Severe?feverwith?thrombocytopenia?syndrome?virus；Novel?Bunyaviridae)，其保藏號為CCTCC?V201211；保藏時間為2012年3月1日；保藏單位為：中國典型培養物保藏中心；保藏地址為：武漢大學生命科學學院武漢市武昌珞珈山。

本發明的目的之二在于提供了利用上述新布尼亞病毒JS-2007-001制備檢測發熱伴血小板減少綜合征病毒抗原的ELISA試劑盒。

本發明的優點在于，經過適應性培養、免疫原性鑒定和免疫保護作用鑒定發現，本發明中分離的JS-2007-001病毒毒種具有最佳的生長特性和適應特性，在較短時間內達到生長高峰，可穩定獲得較高滴度病毒，免疫動物獲得抗體水平較高，從而能開發成為一種穩定的可商業化應用的檢測發熱伴血小板減少綜合征病毒的試劑盒。