[發明專利]b型流感嗜血桿菌多糖結合疫苗活化工藝有效
| 申請號： | 201210121315.2 | 申請日： | 2012-04-23 |
| 公開（公告）號： | CN102626515A | 公開（公告）日： | 2012-08-08 |
| 發明（設計）人： | 吳強;伍長華;魏新;陳愛民 | 申請（專利權）人： | 成都歐林生物科技股份有限公司 |
| 主分類號： | A61K39/385 | 分類號： | A61K39/385;A61K39/102;A61P31/04;C08B37/00 |
| 代理公司： | 成都金英專利代理事務所(普通合伙) 51218 | 代理人： | 袁英 |
| 地址： | 610000 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 流感嗜血桿菌 多糖 結合 疫苗 活化 工藝 | ||
1.b型流感嗜血桿菌多糖結合疫苗活化工藝，其特征在于：它包括以下步驟：
A、制備Hib多糖，其包括以下子步驟：
A?1、將殺菌后的培養液采用8000～1200rpm離心20～40min沉淀菌體，收集上清液；
A?2、將CTAB加入上清液中，CTAB與上清液的重量體積比（w/?v）為1:800～1:1200，室溫攪拌0.5～1.5h，得到的混合液8000～1200rpm離心20～40min后收集CTAB與Hib莢膜多糖的復合物沉淀；
A3、復合物沉淀用0.5～1.5M?氯化鈉溶液溶解，室溫攪拌1～3小時，使Hib莢膜多糖與CTAB解離；加入3～5℃預冷的無水乙醇至乙醇終濃度為20～30%（v/v），3～5℃攪拌過夜；
A?4、8000～1200rpm離心20～40min，收集上清液，上清液中繼續加入無水乙醇至乙醇終濃度為70～80%（v/v），3～5℃攪拌過夜，8000～1200rpm離心20～40min，收集沉淀；
A?5、沉淀用8～12%飽和醋酸鈉溶解，按體積比1:2～1:3加入冷酚，攪拌0.5～1.5小時后6000～8000rpm離心50～70min，收集上清液；
A?6、上清液用0.05～0.15M氯化鈉溶液透析去除殘余苯酚，加入乙醇至終濃度70～80%，離心收集沉淀；
A?7、沉淀用無水乙醇和丙酮各洗一～三次，干燥后用滅菌注射用水溶解，即得Hib多糖；
B、將1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯（CDAP）用乙腈溶解成溶液；
C、將Hib多糖溶解于注射用水中，配制成溶液，調節pH至9.0；
D、按Hib多糖溶液：CDAP溶液=2：1～3:1的體積比向Hib多糖溶液中加入CDAP溶液，室溫攪拌2～5分鐘；
E、將ADH用NaHCO3溶解成溶液，將其按多糖溶液：ADH溶液=1：3～1：5的體積比加入混合溶液中，室溫攪拌0.5～2小時；
F、將反應結束后的溶液上樣于預先用注射用水平衡好的Sephadex?G-25?凝膠層析柱，收集外水體積的洗脫液，凍干即為多糖-ADH衍生物。
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