[發明專利]酶活快速測定方法

無效

• 申請號: 201210120302.3
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN103376245A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 李燕;張皓;黃龍
• 申請（專利權）人: 帝斯曼知識產權資產管理有限公司
• 主分類號: G01N21/59
• 分類號: G01N21/59
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 肖善強

技術領域

本發明屬于食品科學領域，特別是涉及一種谷物水解物的酶活快速測定方法。具體公開了一種酶解谷物來源膳食纖維飲料過程中酶活的快速測定方法。

背景技術

谷物主要是指禾本科植物的種子。它包括稻米、小麥、玉米等及其他雜糧，比如小米、黑米、蕎麥、燕麥、薏仁米、高粱等。谷物通過加工為食物，主要給人類提供的是淀粉、蛋白質、維生素等營養物質。

糧食是供食用的谷物、豆類和薯類的統稱。聯合國糧食及農業組織的糧食概念就是指谷物，包括麥類、粗糧和稻谷類三大類。

糧食加工成可以吃的食品或者可以喝的飲品是人類生活的一大主題。

谷物可以制備成食品、飲料，供人類使用。

富含膳食纖維的谷物，例如燕麥、大麥等，具有更高的營養價值。燕麥有降血脂，降血糖和減少心血管疾病的作用，美國FDA允許在廣告中宣傳其降低膽固醇和預防心臟病的作用。其發揮作用主要是由于可溶性膳食纖維β-葡聚糖的存在。

谷物飲料富含天然膳食纖維及各種均衡營養物質，具有更大的健康價值。

為了便于加工以及釋放谷物膳食纖維及其他營養物質，易于人體吸收，需要采用淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶或其他酶類對谷物進行水解。但是，酶解程度對終產品的穩定性和風味都有很大的影響，因此需要對淀粉、蛋白質或纖維的水解程度進行定性或定量監測和檢測。

關于淀粉酶的活性檢測方法，已有大量的文獻報道，通常是以可溶性淀粉為底物，采用比色法測定殘留淀粉的量或生成還原糖的量進行計算。

在中國國家標準GB?8275-2009(2009年1月19發布)中，提供了α-淀粉酶制劑的酶活力的測定方法。α-淀粉酶是能水解淀粉分子鏈中的α-1，4-葡萄糖苷鍵，將淀粉鏈切斷成為短鏈糊精和少量麥芽糖和葡萄糖，使淀粉黏度迅速下降的酶制劑。原理為α-淀粉酶制劑能將淀粉分子鏈中的α-1，4-葡萄糖苷鍵隨機切斷成長短不一的短鏈糊精、少量麥芽糖和葡萄糖，而使淀粉對碘呈藍紫色的特性反應逐漸消失，呈現棕紅色，其顏色消失的速度與酶活性有關，據此可通過反應后的吸光度計算酶活力。吸取20.0mL的20g/L可溶性淀粉溶液于試管中，加入pH6.0磷酸緩沖溶液5.00mL，搖勻后，置于60℃±0.02℃(中溫α-淀粉酶制劑。備注：對耐高溫α-淀粉酶制劑，則置于70℃±0.02℃)恒溫水浴中預熱8min；加入1.00mL稀釋好的待測酶液，立即計時，搖勻，準確反應5min；立即用自動移液器吸取1.00mL反應液，加到預先盛有0.5mL的0.1mol/L鹽酸溶液和5.00mL稀碘液的試管中，搖勻，并以0.5mL的0.1mol/L鹽酸溶液和5.00mL稀碘液為空白，于660nm波長下，用10nm比色皿迅速測定其吸光度(A)。根據吸光度查表A.1，求得測試酶液的濃度。

酶活力的計算公式分為以下兩種：

其一，中溫α-淀粉酶制劑的酶活力計算

X₁＝c×n????????????(1)

式中：

X₁-------樣品的酶活力，u/mL或u/g；

c------測試酶樣的濃度，u/mL或u/g；

n------樣品的稀釋倍數。

所得結果顯示至整數。

其二，耐高溫α-淀粉酶制劑的酶活力計算

X₂＝c×n×16.67????????????(2)

式中：

X₂-------樣品的酶活力，u/mL或u/g；

c------測試酶樣的濃度，u/mL或u/g；

n------樣品的稀釋倍數。

16.67----根據酶活力定義計算的換算系數。

所得結果顯示至整數。

上述中國國家標準中的方法就是以可溶性淀粉為底物，采用比色法測定殘留淀粉的量計算酶活。

已知還有多個文獻公開了其他酶的酶活測定方法。

中國專利申請200710041289.1(公開號CN101434939A，公開日2009年5月20日)公開了一種從土豆中快速提純酪氨酸酶(TYR)的方法，其中的酪氨酸酶的酶活測定是通過該酶催化L-DOPA的氧化，用紫外分光光度法測定呈紅色的L-DOPA氧化物確定。