[發(fā)明專利]蘇云金芽胞桿菌無芽胞無晶體菌株、其構(gòu)建方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210119832.6
• 申請(qǐng)日: 2012-04-21
• 公開（公告）號(hào): CN102634472A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭琦;宋福平;梁影屏;束長龍;張杰;黃大昉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/21;C07K14/325;C12R1/07
• 代理公司: 北京兆君聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11333
• 代理人: 胡敬紅

1.無晶體無芽胞菌株HD^--ΔSpoIIID，其特征是：在無芽胞突變體菌株HD-ΔSpoIIID中，缺失帶有cry1Ac基因的pHT73質(zhì)粒。

2.權(quán)利要求1所述的無晶體無芽胞菌株HD^--ΔSpoIIID的構(gòu)建方法，包括如下步驟：

(1)將HD-ΔSpoIIID菌株接種于BP培養(yǎng)基，42℃，200r/min培養(yǎng)48小時(shí)，

(2)再接種于BP培養(yǎng)基，42℃，200r/min培養(yǎng)48小時(shí)，

(3)再接種于BP培養(yǎng)基，45℃，200r/min培養(yǎng)12小時(shí)，

(4)取菌液涂布于固體LB培養(yǎng)基，30℃倒置培養(yǎng)48小時(shí)，

(5)用得到的菌斑鑒定HD-73野生菌株中的含cry1Ac基因的大質(zhì)粒pHT73的引物進(jìn)行鑒定，選出含

有cry1Ac基因的pHT73質(zhì)粒缺失的菌株，命名為HD^--ΔSpoIIID。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，所述含cry1Ac基因的大質(zhì)粒pHT73的引物為：

T1Ac3′：5′-ATGGAAAAAGATTTATTTGAAGATG-3′，

T1Ac5′：5′-CTCTTTATTTTCAATTTTTCGAAGT-3′。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其中步驟(1)、(2)接種量為1％。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其中步驟(3)接種量為4％。

6.權(quán)利要求1所述的無晶體無芽胞菌株HD^--ΔSpoIIID在表達(dá)Cry蛋白和構(gòu)建工程菌中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，所述Cry蛋白為Cry1Ac蛋白、Cry3Ac蛋白、Cry4A蛋白、Cry8E蛋白。

8.權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，所述工程菌為HD^--ΔSpoIIIDpHTP1Ac、HD^--ΔSpoIIIDpHTP3Ac、HD^--ΔSpoIIIDpHTP4A和HD^--ΔSpoIIIDpHTP8E，其結(jié)構(gòu)為在菌株HD^--ΔSpoIIID中分別轉(zhuǎn)有啟動(dòng)子Pcry1A，Pcry3A，Pcry4A和Pcry8E與cry1Ac基因融合的表達(dá)載體pHTP1Ac、pHTP3A、pHTP4A和pHTP8E。