[發(fā)明專利]一種從紅楠中提取純化楠木脂素A的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210117553.6
• 申請日: 2012-04-20
• 公開（公告）號: CN102659749A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉東鋒;郭琴
• 申請（專利權(quán)）人: 南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07D317/50
• 分類號: C07D317/50
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種從紅楠中提取純化楠木脂素A的方法。

背景技術(shù)

楠木脂素A（Machilin?A），分子式為C₂₀H₂₂O₄，分子量為326.39，為無色針晶，是從樟科植物紅楠Machilus?thunbergii?Sieb.et?Zucc.的樹皮分離出的一種木脂素類化合物。藥理研究表明，楠木脂素A具有免疫抑制活性，對分裂素（刀豆球蛋白A）誘導(dǎo)的人外周血液淋巴細(xì)胞增生有極強的抑制作用，其IC₅₀為0.02μg/mL，與強的松龍相當(dāng)，另外還具有細(xì)胞毒活性，對人型白血病細(xì)胞株HL-60和Molt-4細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性，其IC₅₀（ng/ml）分別為26和54。

目前尚未檢索到楠木脂素A的制備方法報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種從紅楠中提取純化楠木脂素A的方法，

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種從紅楠中提取純化楠木脂素A的方法，其特征在于包括以下步驟：將紅楠樹皮晾干粉碎，粉碎后以50-95%乙醇浸泡3-6小時，然后超聲提取1-2小時，提取液加入硅藻土與活性炭的混合物，所述混合物加入量為提取液的2-6%（w/v），充分?jǐn)嚢韬筮^濾，濾液通過大孔吸附樹脂柱，收集洗脫液減壓回收試劑，經(jīng)制備液相色譜分離，即可獲得楠木脂素A。

所述硅藻土與活性炭的混合物，硅藻土與活性炭的質(zhì)量比為1:2。

所述大孔樹脂為AB-8、D101等極性或非極性大孔吸附樹脂，洗脫劑為10-90%乙醇溶液。

所述制備液相色譜分離，以甲醇-水為流動相，甲醇體積百分比為50-80%，流速為10-100ml/min。

本發(fā)明采用超聲提取、大孔樹脂吸附柱層析及制備液相色譜分離純化，具有生產(chǎn)過程簡單，易于實現(xiàn)工業(yè)化等優(yōu)點，且在整個工藝過程避免使用有毒溶劑，安全環(huán)保。

下面將結(jié)合具體實施方式進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1：

將2kg紅楠樹皮晾干粉碎加入提取罐中，加入4倍量80%乙醇溶液，浸泡4小時，然后超聲提取2小時，將提取液加入硅藻土與活性炭按質(zhì)量比1:2混合的混合物，加入量為提取液的5%（w/v），充分?jǐn)嚢韬筮^濾，將濾液濃縮至無醇，通過AB-8大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積的10%乙醇洗脫，洗脫液回收試劑后棄去，再用4倍柱體積85%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗品。將粗品用甲醇配制成20mg/ml的溶液，用制備型高效液相色譜分離，制備柱以C18為柱填料，以甲醇-水（63:37）為流動相，控制流速為45ml/min，收集目標(biāo)成分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮干燥，得到0.62g楠木脂素A產(chǎn)品，含量為96.7%。

實施例2：

將2kg紅楠樹皮晾干粉碎加入提取罐中，加入3倍量65%乙醇溶液，浸泡3小時，然后超聲提取2小時，將提取液加入硅藻土與活性炭按質(zhì)量比1:2混合的混合物，加入量為提取液的4%（w/v），充分?jǐn)嚢韬筮^濾，將濾液濃縮至無醇，通過D101大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積的15%乙醇洗脫，洗脫液回收試劑后棄去，再用6倍柱體積80%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗品。將粗品用甲醇配制成20mg/ml的溶液，用制備型高效液相色譜分離，制備柱以C18為柱填料，以甲醇-水（56:44）為流動相，控制流速為55ml/min，收集目標(biāo)成分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮干燥，得到0.60g楠木脂素A產(chǎn)品，含量為96.3%。

實施例3：

將5kg紅楠樹皮晾干粉碎加入提取罐中，加入6倍量50%乙醇溶液，浸泡6小時，然后超聲提取1小時，將提取液加入硅藻土與活性炭按質(zhì)量比1:2混合的混合物，加入量為提取液的2%（w/v），充分?jǐn)嚢韬筮^濾，將濾液濃縮至無醇，通過AB-8大孔吸附樹脂柱，先用6倍柱體積的20%乙醇洗脫，洗脫液回收試劑后棄去，再用5倍柱體積75%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗品。將粗品用甲醇配制成20mg/ml的溶液，用制備型高效液相色譜分離，制備柱以C18為柱填料，以甲醇-水（73:27）為流動相，控制流速為20ml/min，收集目標(biāo)成分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮干燥，得到1.48g楠木脂素A產(chǎn)品，含量為97.4%。

實施例4：

將5kg紅楠樹皮晾干粉碎加入提取罐中，加入5倍量95%乙醇溶液，浸泡5小時，然后超聲提取2小時，將提取液加入硅藻土與活性炭按質(zhì)量比1:2混合的混合物，加入量為提取液的6%（w/v），充分?jǐn)嚢韬筮^濾，將濾液濃縮至無醇，通過D101大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積的25%乙醇洗脫，洗脫液回收試劑后棄去，再用5倍柱體積90%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗品。將粗品用甲醇配制成20mg/ml的溶液，用制備型高效液相色譜分離，制備柱以C18為柱填料，以甲醇-水（50:50）為流動相，控制流速為65ml/min，收集目標(biāo)成分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮干燥，得到1.36g楠木脂素A產(chǎn)品，含量為98.2%。