[發明專利]一種絲狀真菌啟動子及其應用

有效

• 申請號: 201210116460.1
• 申請日: 2012-04-19
• 公開（公告）號: CN103374571A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 李建軍;黃雪年;譚俊;呂雪峰
• 申請（專利權）人: 中國科學院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/80;C12N1/15
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體的說是一種絲狀真菌啟動子及其應用。

背景技術

絲狀真菌因其分泌能力好、生產能力強、營養要求低且能產生種類繁多的代謝產物而受到廣泛關注。絲狀真菌在生物技術領域作為細胞工廠廣泛應用于各種產品的生產，從簡單的有機酸到復雜的次級代謝產物，從來源于絲狀真菌自身到異源的各種蛋白質等。通過代謝工程對生產菌株進行改造，提高目標產物的生產水平，具有非常重要的意義。改造的前提是絲狀真菌中導入的外源基因能夠在啟動子的調控下實現高效表達，研究比較多的絲狀真菌啟動子主要包括來自米曲霉的α-淀粉酶啟動子PamyL(Christensen，T.，Woeldike，H.，Boel，E.，Mortensen，S.B.，Hjortshoej，K.，Thim，L.and?Hansen，M.T.，High?Level?Expression?ofRecombinant?Genes?in?Aspergillus?Oryzae，Nat.Biotechnol.，1988，6，1419-1422)、黑曲霉的葡萄糖淀粉酶啟動子PglaA(Gwynne，D.I.，Buxton，F.P.，Williams，S.A.，Garven，S.&?Davies，R.W.，GeneticallyEngineered?Secretion?of?Active?Human?Interferon?and?a?BacterialEndoglucanase?from?Aspergillus?Nidulans，Nat.?Biotechnol.，1987，5，713-719)、構巢曲霉的甘油醛-3-磷酸脫氫酶啟動子PgpdA(van?Gorcom，R.F.，Punt，P.J.，Pouwels，P.H.，van?den?Hondel，C.A.，A?system?forthe?analysis?of?expression?signals?in?Aspergillus，Gene，1986，48，211-217.)?？晒┻x擇的絲狀真菌強啟動子并不多，當需要在真菌宿主中同時過量表達多種不同的基因時，知道多種功能性啟動子是有益的，為防止壓制特定轉錄因子的滴定(titration)，優選使用多種不同的啟動子，對每種待表達基因使用一種特定的啟動子。

檸檬酸合成酶作為三羧酸循環中的一個關鍵酶，其轉錄水平顯而易見，因此檸檬酸合成酶啟動子是一個強的組成型啟動子。Ruijter等人發現在檸檬酸生產過程中檸檬酸合成酶不是限速瓶頸，這說明檸檬酸合成酶在高產檸檬酸的黑曲霉菌株中高水平表達(Ruijter，G.J.G.，Panneman，H.，Xu，D.and?Visser，J.，Properties?of?Aspergillusniger?citrate?synthaseand?effect?of?citA?overexpression?on?citric?acid?production，FEMSMicrobio?l.Lett.，2000，184，35-40)。Dave等人最近研究了來自黑曲霉的檸檬酸合成酶啟動子PcitA(Dave，K.and?Punekar，N.S.，Utility?ofAspergillus?niger?citrate?synthase?promoter?for?heterologousexpre?s?s?ion，J.Biotechnol.，2011，155，173-177)，該啟動子能有效驅動綠色熒光蛋白的表達。關于土曲霉(Aspergillus?terreus)檸檬酸合成酶啟動子的研究至今未見報道。

發明內容

本發明目的在于提供一種絲狀真菌啟動子及其應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種絲狀真菌啟動子，絲狀真菌啟動子核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1、SEQID?NO.2、SEQ?ID?NO.3或SEQ?ID?NO.4所示。

所述絲狀真菌啟動子為SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3或SEQ?ID?NO.4所示核苷酸序列的互補序列。

所述絲狀真菌啟動子為SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3或SEQ?ID?NO.4所示具有60％或60％以上的同一性或具有相同功能的核苷酸序列；或

所述絲狀真菌啟動子為SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3或SEQ?ID?NO.4所示具有60％或60％以上的同一性或具有相同功能的核苷酸序列的互補序列。