[發明專利]人宮內膜(經血)干細胞庫的構建

無效

• 申請號: 201210116237.7
• 申請日: 2012-04-19
• 公開（公告）號: CN103374760A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 孫勇
• 申請（專利權）人: 孫勇
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.人宮內膜(經血)干細胞庫的構建，其特征在于：

(1)干細胞的采集和運輸，用醫用級硅膠杯收集月經干送至干細胞制備室。

(2)干細胞信息記錄，將運送至干細胞制備室的樣本信息輸入“宮內膜(經血)干細胞儲存信息表”。

(3)干細胞的制備，月經在GMP車間處理后在特殊的培養基中培養擴增。

(4)干細胞的質檢，將培養擴增的干細胞進行質量檢驗。

(5)干細胞的凍存，質檢合格的干細胞儲存于-196℃液氮罐中以備用。

(6)干細胞的復蘇培養及發送，從液氮罐中取出的干細胞快速復蘇后，在擴增培養基中培養并質檢和發放。

(7)庫的信息化管理，將干細胞從采集到發放的完整過程記錄備案。

2.根據權利要求1所述的人宮內膜(經血)干細胞庫的構建，其特征是：(1)干細胞的采集和運輸。簽訂“月經干儲存服務協議書”，儲戶取出“月經干采集運輸醫用級泡沫盒”內的醫用級硅膠杯，外陰經無菌消毒布塊消毒后，在月經第二天收集，所收集的樣本裝入抗菌素和抗凝劑，并按照要求包裝好“月經干采集運輸醫用級泡沫盒”(放好小冰塊和干燥劑等)，填寫好“月經干采集運輸信息表”(包括儲戶的肝炎檢驗如HAV、HBV、HCV、HDV和HEV，及病毒如HIV-1/2、梅毒螺旋體、巨細胞病毒及寄生蟲等)。樣本保持在1-10°范圍內，收集完24小時內發送至干細胞制備室。

3.根據權利要求1所述的人宮內膜(經血)干細胞庫的構建，其特征是：(2)干細胞信息記錄。樣本運至干細胞接收室后，將儲戶基本信息、基本體檢信息和/或疾病史等、樣本收集信息、樣本運輸信息、樣本外觀等信息、樣本至干細胞接收室交接信息等輸入“宮內膜(經血)干細胞儲存信息表”，并留存“月經干采集運輸信息表”。

4.根據權利要求1所述的人宮內膜(經血)干細胞庫的構建，其特征是：(3)干細胞的制備。月經干樣本在GMP100級車間用混合抗菌素包括萬古霉素、頭孢噻肟鈉、氨基羥丁基卡那霉素A(即：抗菌素BBK8)、慶大霉素和兩性霉素B處理防止污染，用100目濾網過濾以去除組織塊，并用PBS洗滌，重懸于DMEM/F12完全培養基，以1X10⁵/ml接種于經10ug/ml多聚賴氨酸包被的T25細胞培養瓶，并添加：5ng/ml?ITS(胰島素、轉鐵蛋白、硒)，100u/ml青霉素，100u/ml鏈霉素，2％人血清，10ng/ml?of?rEGF，10ng/ml?of?rPDGF-bb，15ng/ml?ofLIF，20ng/ml?of?bFGF，常規培養8小時后，去除上清液(過濾除去雜質細胞以備后用)。同時用0.25％胰酶邊消化、離心，并接種于多聚賴氨酸包被的T25細胞培養瓶繼續培養。

5.根據權利要求1所述的人宮內膜(經血)干細胞庫的構建，其特征是：(4)干細胞的質檢。P2代干細胞上清液質檢：革蘭氏菌涂片、厭氧菌、需氧菌培養、真菌和霉菌，干細胞經0.25％胰酶消化后800r/min離心6min重懸，用DMEM/F12完全培養液洗二次，并進一步做有核細胞計數及活力觀察、流式檢測(CD44，CD73和CD34)、克隆集落形成實驗。

6.根據權利要求1所述的人宮內膜(經血)干細胞庫的構建，其特征是：(5)干細胞的凍存。需凍存的干細胞用低溫儲存條碼編號，并按比例凍存：10％的DMSO、30％PBS、10％人血清白蛋白(25％)、50％干細胞懸液。凍存液及干細胞在加入凍存管前冷卻至2-8℃，細胞加入凍存液后以(1-2)X10⁶/ml濃度凍存。凍存管在-86℃冰箱凍存2-4小時后移至-196℃液氮罐中保存。

7.根據權利要求1所述的人宮內膜(經血)干細胞庫的構建，其特征是：(6)干細胞的復蘇培養及發送。從液氮罐中取出的干細胞放入37-40℃水浴，融化的細胞經完全培養基洗滌接種于T-25組織培養瓶，并加入相關營養因子，常規培養。干細胞培養達到臨床需求時消化干細胞，并做質檢：細胞活力、數量、革蘭氏染色。按照臨床要求填寫“宮內膜干細胞發放報告單”，中心主任簽字認可發放。

8.根據權利要求1所述的人宮內膜(經血)干細胞庫的構建，其特征是：(7)庫的信息化管理。將干細胞從采集、運輸、交接、制備、質檢、凍存、復蘇、培養、發送等實驗步驟的詳細信息完整地輸入“宮內膜(經血)干細胞儲存信息表”，同時保留原始的實驗記錄簿(兩人簽字)。做好廢棄樣本或干細胞的信息記錄以及醫用廢棄物處理。注意：質檢報告需要加入廠房維護、車間消毒、儀器設備的驗證、物料批次、工藝、人員培訓等相關質檢內容也應輸入“宮內膜(經血)干細胞儲存信息表”。