[發(fā)明專利]基于金納米粒子的組裝平臺及其制備方法

無效

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• 申請日: 2012-04-19
• 公開（公告）號: CN102659073A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設計）人: 費浩;馬曉川;賈俊麗;王小波
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州納米技術與納米仿生研究所
• 主分類號: B82B3/00
• 分類號: B82B3/00;B82Y40/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明特別涉及一種基于金納米粒子的多肽多價偶聯(lián)組裝平臺及其制備方法，其可于細胞成像和高效殺傷等方面廣泛應用，屬于基于納米材料的組裝平臺技術領域。

背景技術

納米技術是一個多學科交叉的科研領域，深刻的影響著基礎科學和臨床醫(yī)學的研究。納米藥物以及運輸傳統(tǒng)藥物的納米載體系統(tǒng)都展現(xiàn)出了顯著的優(yōu)勢。

在眾多納米材料中，納米金作為一種經典的納米粒子，具有易觀察性、低毒性，良好的生物相容性和穩(wěn)定性、易于合成，大小可控等優(yōu)點，被廣泛應用于生物納米技術中。同時，納米金顆粒能提供很大的比表面積，便于人們在其表面修飾各種小分子（如短肽，蛋白質，核酸等），且不影響其生物活性。

傳統(tǒng)的納米金表面修飾的方法有很多種，然而大多是在納米金表面進行單層修飾，即同時混合包裹不同功能的多肽，蛋白，PEG等。單層修飾一般是一步包裹過程中要求同時完成包裹結構形成，穩(wěn)定和功能化，其不僅難以標準化，且各成分的比例稍有變動，對結果可能產生很大的影響，同時，各項指標若要調整和優(yōu)化都將很困難，再者，單層修飾容易產生聚集（比如，SH-PEG交聯(lián)的陽離子多肽直接包裹可能會引起聚集），而且對于不同的包裹對象或對象的組合，組裝結果都可能有所不同，因此必須針對每個不同的體系做一些特殊的調整，以使整個體系穩(wěn)定，且可以正常行使功能。這樣，體系穩(wěn)定優(yōu)化的過程繁瑣，導致包裹分子的功能多樣性受到了限制。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術中的不足，提出一種基于金納米粒子的多肽多價偶聯(lián)組裝平臺及其制備方法，該組裝平臺集熒光成像，高效入胞，靶（定）向轉運等功能于一身，且具有低毒性，高穩(wěn)定等特點，從而克服了現(xiàn)有技術中的不足。

為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了如下技術方案：

該基于金納米粒子的組裝平臺包括：

金納米粒子，形成于金納米粒子上的第一修飾層，形成于第一修飾層上的第二修飾層，以及，形成于第二修飾層上的第三修飾層。

進一步的，所述第一修飾層、第二修飾層和第三修飾層分別主要由第一功能材料、第二功能材料和第三功能材料組成，其中，第一功能材料是通過共價鍵合方式連接在金納米粒子表面的，且所述第一功能材料具有的第一活性基團能夠與第二功能材料的第一活性位點特異性結合，所述第二功能材料的第二活性位點能夠與第三功能材料具有的第二活性基團特異性結合。

該基于金納米粒子的組裝平臺的制備方法為：首先，將第一功能材料修飾至金納米粒子表面，形成于第一修飾層；而后，利用第二功能材料具有的第一活性位點與第一功能材料的第一活性基團之間的特異性結合，將第二功能材料修飾于第一修飾層上，形成第二修飾層；最后，利用第三功能材料的第二活性基團與第二功能材料的第二活性位點之間的特異性結合，將第三功能材料修飾于第二修飾層上，形成第三修飾層，獲得目標產物。

優(yōu)選的，所述第一功能材料、第二功能材料和第三功能材料優(yōu)選采用多肽、蛋白質、核酸和熒光分子等功能性分子材料中的任意一種或兩種以上的組合；

所述第一活性基團與第二活性基團優(yōu)選采用生物素，所述第二功能材料優(yōu)選采用鏈霉親和素或其衍生物，所述第一活性位點和第二活性位點均為鏈霉親和素分子所具有的可與生物素特異性結合的亞基。

所述第二功能材料上還連接有熒光染料。

作為優(yōu)選的實施方案之一，該方法包括如下具體步驟：

（1）取膠體金溶液與一種以上生物素修飾的多肽混合，且令納米金顆粒與多肽的摩爾比為1:50-200，室溫孵育10min以上，而后離心，去上清，余留物以磷酸緩沖液重懸，反復二次以上；

（2）取經熒光染料標記的鏈霉親和素與經步驟（1）處理后的納米金顆粒按1:50-200的摩爾比混合，室溫孵育1h以上，反應完畢后離心、棄去上清液，余留物以PBS緩沖液洗滌沉淀，獲得經熒光標記的納米金顆粒；

（3）將步驟（2）所得熒光標記的納米金顆粒與一種以上生物素修飾的多肽按1:100-200的摩爾比均勻混合，室溫孵育30min以上，獲得目標產物。

優(yōu)選的，步驟（1）中所述膠體金溶液中所含納米金粒子的粒徑為10-30nm。

優(yōu)選的，步驟（2）中經熒光染料標記的鏈霉親和素是經如下方法制備的：

取熒光染料RBITC與鏈霉親和素均勻混合，室溫孵育30min以上，而后以脫鹽柱純化，獲得目標產物，且該目標產物中鏈霉親和素與RBITC的摩爾比為1:1~4。