[發明專利]一種阿維菌素B1a高產菌株及其應用

無效

• 申請號: 201210113850.3
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN102634471A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 虞龍;龔文靜;崔莉;黃思思;陳曉雙
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/62;C12R1/465
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌

技術領域

本發明涉及微生物發酵領域，具體涉及一種阿維菌素B1a高產菌株及其誘變方法與其在發酵生產阿維菌素B1a中的應用。

背景技術

阿維菌素(avermectin，AVM)是一種由放線菌阿維鏈霉菌(streptomyces?avermitilis)經液體發酵產生的一類十六元環內脂類抗生素，是一種全新無公害生物農用抗生素，具有高效、低毒及環境友好等特點，對蔬菜、果樹、棉花、水稻等多種作物的相關害蟲有良好防效殺滅作用，其殺蟲活性比一般化學農藥高出幾到幾十倍。作為一種農用殺蟲劑，阿維菌素的作用機理獨特，對害蟲具有觸殺和胃毒作用，對靶標作物有較強的滲透作用，能有效防治雙翅目、同翅目、鞘翅目和磷翅目害蟲。作為農用藥物，它具有高選擇性和高安全性。在常用劑量下，不僅對人畜安全，還不傷害大多種類的有益昆蟲，不破壞生態。在光照條件下或在土壤微生物作用下迅速降解成無活性的化合物，其分子碎片最終作為碳源被植物和微生物分解利用，幾乎無任何殘留毒性。在水中易降解，無殘留，不污染環境，且在生物體內也無積累和持久性殘留。是目前世界上最有前途的生物殺蟲殺螨劑。

目前，上千種阿維菌素衍生物已經合成出來，已經商品化的有伊維菌素(ivermectin，簡稱IVM)，埃瑪菌素(emamectin，又稱甲氨基阿維菌素)，道拉菌素(dormectin)，埃珀利諾菌素(eprinomectin，又稱乙酰氨基阿維菌素)和色拉菌素(selamectin)等。可見，阿維菌素不僅是一個優異的產品，更是一種寶貴的資源，被認為是繼青霉素以來抗生素的又一次革命。因此，市場拉動和技術進步都推動了阿維菌素得迅猛發展。

經發酵產生的阿維菌素中包括結構類似物共8種，按其中的C₅、C_22-23、C₂₆三個位置上的結構差異可以區分為A1a、A1b、A2a、A2b、B1a、B1b、B2a、B2b?8種組分，其中B組分的生物活性優于A組分，其中以B1a組分活性最高且毒性最小。因此，提高發酵產物中B1a組分已經成為目前研究領域的重點。例如，河北大學生命科學學院趙麗坤等人利用紫外線-氯化鋰(UV-LiCl)和紫外線-亞硝基胍(UV-NTG)對其進行復合誘變處理獲得了一株相對出發菌株含量提高65％左右的高產菌株。沈陽藥科大學生物技術與生物制藥實驗室采用NTG、DES、紫外線等誘變因子對阿維鏈霉菌的原始菌株進行了多次誘變處理，產量有了明顯提高。CN201110003059.2公開了一種阿維菌素生產菌及其制備方法，其通過反復的誘變和篩選得到一株名為FT26-9的高產菌株，其應用于工業生產可提高發酵單位40％左右。但由于其誘變大多采用了具有致癌作用的劇毒有機試劑，且誘變工藝復雜，對人體健康和環境保護帶來不利影響，上述技術方案有待進一步提高。

發明內容

本發明要解決的技術問題之一在于提供一種簡單、高效、安全的阿維菌素B1a高產菌誘變方法，誘變篩選得到一株可大幅度提高發酵產物中阿維菌素B1a組分的阿維菌素B1a高產菌株。

本發明要解決的技術問題之二在于提供上述阿維菌素B1a高產菌株的應用。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

一種阿維菌素B1a高產菌株，其分類命名為阿維鏈霉菌(streptomyces?avermitilis)AVE07-N2-16515，已于2012年4月8日保藏于中國典型培養物保藏中心CCTCC，保藏編號：CCTCC?NO：M?2012094。

本發明所述的阿維菌素B1a高產菌株阿維鏈霉菌AVE07-N2-16515的篩選方法是：將阿維鏈霉菌出發菌株，經低能氮離子注入-氯化鋰(N⁺-LiCl)復合誘變結合紫外線-氯化鋰(UV-LiCl)復合誘變后，通過初篩、搖瓶發酵復篩選獲阿維菌素B1a產量高的菌株作為下一輪誘變的出發菌株，重復上述誘變過程，最后篩選出阿維菌素B1a產量高的目標菌株。

本發明菌株的形態學及生理生化學特征如下：

菌落顏色：灰白色。

需氧方式：好氧生長。

菌落大小：2～5mm。

適宜生長溫度：27.5～28.5℃。

適宜生長pH：7.2～7.4。

菌體形態：圓形菌落，無光澤。

革蘭氏染色：陽性。

本發明所提供的阿維菌素B1a高產菌株的誘變方法，具體步驟如下：

(a)、單孢子懸浮液制備：將阿維鏈霉菌出發菌株孢子制成孢子懸液，調整孢子濃度為10⁶個/毫升。