[發明專利]組織特異性表達的24-脫氫膽固醇還原酶編碼重組腺病毒

有效

• 申請號: 201210113722.9
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN102787101A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發明（設計）人: 蘆秀麗;高兵;劉劍利;趙晨光;賈丹
• 申請（專利權）人: 遼寧大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/53
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

技術領域

本發明涉及阿爾茨海默癥基因治療法與治療領域。更具體地，本發明涉及利用基因工程技術構建含有dhcr24基因的復制缺陷型重組腺病毒，以及這些腺病毒載體在將dhcr24基因轉移入細胞以及實現DHCR24蛋白在神經細胞等細胞中特異性過表達的應用。制備的重組腺病毒有望在阿爾茨海默癥以及糖尿病等疾病的基因治療中獲得肯定的療效。?

背景技術

阿爾茨海默病(Alzheimer?Disease，AD)是一種起病隱襲的神經系統退行性疾病，臨床上以記憶與認知功能障礙為特征，是老年癡呆病中最常見的類型。有關專家預言，至2025年全世界將有2200?萬人口罹患AD；另據估計，2012?年該治療領域的市場價值可達200億美元。WHO已將老年癡呆癥定為21世紀五大重點疾病之一。尋找治療老年癡呆癥的有效藥物，成為世界醫學界的研究熱點之一。但是由于AD的發病機制尚不明了，目前臨床上還沒有一種療效確切的治療藥物。?

20世紀80年代以來出現的“β淀粉樣蛋白(Aβ)學說”作為AD的治病病理學說被廣泛接受。該學說認為β淀粉樣蛋白(Aβ)在腦組織中的沉積可能是阿爾茨海默病發生、發展的中心環節。Aβ是淀粉樣前體蛋白(APP)的水解產物。Aβ的增加和聚集所形成的老年斑具有神經毒性，可通過引起氧化應激或者內質網應激導致廣泛的神經元變性或死亡。例如Aβ的蓄積能通過直接引發神經細胞內鈣離子的釋放而誘發內質網應激和神經毒性。因此，凡能減少Aβ產生，加快其清除，或阻止其聚集，或對抗Aβ的毒性引發的氧化應激或內質網應激引起的細胞凋亡的治療阿爾茨海默病的策略，已經成為目前國際上研究最熱門的治療阿爾茨海默病藥物研發方向。但是目前該項研究尚未取得突破性進展，還沒有此類藥物進入市場。?

近年來，關于AD患者腦內膽固醇代謝的特征及其與AD病程進展的關系的研究取得了很多進展。在腦組織中，膽固醇的作用尤為重要：膽固醇對神經軸突的信號傳遞、神經生長、修復和重塑起重要作用，神經元載體的功能及突觸的發生，成熟及可塑性的維持也都離不開膽固醇的參與。而神經元培養研究顯示，?膽固醇水平的減少會抑制樹突的延伸和突觸的生成，?并認為這可能與tau蛋白(一種與AD發病有關的微管蛋白)的磷酸化有關。正常的腦功能需要恒定的膽固醇水平。腦膽固醇不能從血中攝取，只能由自身合成，其腦內含量與血清膽固醇無關，只與其自身合成量和轉出量有關。膽固醇是細胞膜上超微結構脂質筏（Lipid?raft）及細胞窖（caveolae）的主要構成成分，參與多數細胞信號轉導。研究顯示多種神經營養因子作用如NGF、GDNF、EGF?和?FGF?等都需要依賴其受體在脂質筏中的定位而實現。大多數突觸生成需要的膽固醇主要來自星型膠質細胞的大量合成，并由含載脂蛋白ApoE的脂蛋白運輸到神經元。研究發現ApoE的基因結構具有明顯的遺傳多態性，?其中ApoE4?(ApoE中HDL新生能及膽固醇供給能最小的基因型)?是遲發性家族性老年性癡呆和散發性老年性癡呆的主要危險因子。ApoE4的基因敲除小鼠突觸細胞膜的膽固醇含量比正常組顯著增高。而DHCR24是膽固醇合成的最終階段鏈甾醇desmonsterol還原為膽固醇過程的關鍵酶。腦內膽固醇在24S-羥化酶(CYP46)的作用下降解為24S-羥膽固醇，通過血腦屏障，由LDL轉運至肝臟代謝。AD患者腦內膽固醇代謝存在明顯異常。例如Heverin等指出24S-羥膽固醇的含量在全腦各區均下降，膽固醇／24S-羥膽固醇的比值與之類似，提示AD患者腦內膽固醇含量的降低。盡管有一些證據表明血清膽固醇含量的增加可能增加寡聚Aβ（oligomeric?Aβ）的產生和蓄積，但是這種Aβ蓄積反之也會引發膽固醇從神經細胞膜的流失從而導致tau的過度磷酸化及突觸可塑性的損傷，提示膽固醇從神經細胞膜的流失很可能是最終導致AD發病的重要因素。由此可見，膽固醇代謝異常幾乎與所有重要的AD發病機制有關。因此調節膽固醇代謝合成代謝過程中的某些靶點，將有可能突破AD藥物研究的瓶頸，促使新治療方法的誕生。?