[發明專利]睪丸酮叢毛單胞菌3，17β-羥基類固醇脫氫酶及其用途

無效

• 申請號: 201210113446.6
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN102604905A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 于源華;王保學;于化東;張曉;張昊
• 申請（專利權）人: 長春理工大學
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N15/70;A62D3/02;A62D101/28
• 代理公司: 長春眾益專利商標事務所(普通合伙) 22211
• 代理人: 紀尚

技術領域

本發明屬于應用環境微生物技術領域，涉及一種利用分子生物學技術，從睪丸酮叢毛單胞菌中克隆到一個新的基因，在降解環境污染物睪丸酮、膽固醇上的應用。

背景技術

，17β-羥基類固醇脫氫酶（3，17β-HSD）是睪丸酮叢毛單胞菌（C.testosteroni）中降解類固醇等物質的系列酶中的關鍵酶，阿根廷科學家利用Northern的分子生物學手段研究發現，此酶受部分類固醇激素誘導（Identification?of?a?novel?steroid?inducible?gene?associated?with?The??βhsd?locus?of?Comamonas?testosteroni，José?Luis?Pruneda-Paz?and?so?on，Argentina），然而對于其基因結構及功能未進行研究，國內未見報道。尤其是在C.testosteroni以及假單胞桿菌中未見報道。

發明內容

本發明的目的是：提供一種睪丸酮叢毛單胞菌3，17β-羥基類固醇脫氫酶及其用途，3，17β-HSD基因是首次從C.testosteroni中克隆得到的，并對它進行了序列測定與分析。同時在大腸桿菌中進行了該基因的高表達以及生物功能的確定。此酶是由254個氨基酸殘基組成的，SDS-PAGE顯示分子量為29.5KD。研究發現3，17β-HSD對睪丸酮、膽固醇有高效降解作用（降解率達90%以上），是一種可作用于多種類固醇的酶，該酶的研究、開發和應用在檢測和降解環境中睪丸酮、膽固醇及其衍生物具有極大的價值。

本發明的睪丸酮叢毛單胞菌3，17β-羥基類固醇脫氫酶（3，17β-HSD）是：

?Xho?I?起始密碼子

GCTCGAGATGACAAATCGTTTGCAGGGTAAGGTGGCGCTGGTCACTGGTGGTGCCAGCGGTGTGGGTCTTGAGGTGGTGAAGCTGCTTCTTGGCGAAGGCGCCAAGGTCGCATTCAGCGATATCAATGAAGCGGCGGGGCAGCAACTGGCGGCTGAACTGGGCGAACGCTCCATGTTTGTCCGCCATGACGTGAGCAGCGAGGCGGACTGGACGCTTGTGATGGCGGCGGTGCAGCGGCGTCTGGGCACGCTCAATGTGCTGGTCAACAATGCCGGCATCCTGCTGCCTGGTGACATGGAAACAGGGCGTCTGGAGGATTTCAGCCGCCTGCTCAAGATCAACACCGAGTCAGTCTTCATTGGTTGCCAGCAGGGCATTGCGGCGATGAAGGAGACAGGAGGCTCCATCATCAATATGGCCTCGGTATCGAGCTGGCTGCCCATAGAGCAATACGCCGGCTATAGCGCCAGCAAGGCCGCCGTGTCGGCACTGACCCGCGCCGCTGCACTGAGCTGTCGAAAGCAAGGCTATGCGATTCGCGTCAATTCCATTCATCCCGATGGCATCTATACGCCCATGATGCAGGCTTCGCTGCCAAAGGGCGTGAGCAAGGAAATGGTCTTGCATGACCCCAAGCTCAACCGTGCCGGCCGCGCCTATATGCCCGAGCGTATCGCGCAGCTGGTGTTGTTCCTGGCCAGCGACGAGTCCAGTGTCATGAGCGGTAGCGAGCTGCATGCAGATAACTCGATTCTGGGCATGGGGCTATAGGGATCCTTAT

??????????????????????????????????終止密碼子?BamH?I

本發明的睪丸酮叢毛單胞菌3，17β-羥基類固醇脫氫酶（3，17β-HSD）制取方法是：

1.以C.testosteroni基因組為模板，通過PCR技術擴增了末端含有Xho?I和BamH?I酶切位點的DNA片段，對其進行了亞克隆及測序，用軟件Vector?nti?11.5.1對所測定序列進行開放閱讀框分析，為一個完整的開放閱讀框，基因全長765bp(如下所示)，通過所測定序列做BLAST分析，確定該基因為3，17β-HSD。