[發明專利]細胞培養基及其用途

有效

• 申請號: 201210113444.7
• 申請日: 2012-04-17
• 公開（公告）號: CN102676448A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 裴雪濤;陳琳;岳文;習佳飛;師偉;姚海雷;呂洋;張秀媛;謝小燕;劉大慶
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12M3/00;C12Q1/02
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種細胞培養基，其特征在于，包含：

基礎培養基，所述基礎培養基為AminomaxC-100培養基；

AmnioMaxC-100supplement；

bFGF；以及

DMOG，

任選地，所述AmnioMaxC-100supplement與所述AminomaxC-100基礎培養基的體積比為1∶6，

任選地，所述bFGF的濃度為4-10ng/ml，優選5ng/ml，

任選地，所述DMOG的濃度為200-500μM，優選300μM。

2.一種用于體外培養毛乳頭細胞的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有bFGF和DMOG，

任選地，進一步包含AmnioMaxC-100supplement，

任選地，所述bFGF、DMOG和AmnioMaxC-100supplement分別設置在不同的容器中，

任選地，進一步包含基礎培養基，所述基礎培養基為AminomaxC-100培養基，

任選地，所述bFGF、DMOG和AmnioMaxC-100supplement的至少之一溶解于基礎培養基，

任選地，所述bFGF的濃度為4-10ng/ml，優選5ng/ml，

任選地，所述DMOG的濃度為200-500μM，優選300μM。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，進一步包含AmnioMaxC-100supplement，

任選地，所述AmnioMaxC-100supplement與所述AmnioMaxC-100基礎培養基的體積比為1∶6。

4.一種用于體外培養毛乳頭細胞的試劑盒，其特征在于，包含權利要求1所述的培養基。

5.權利要求1所述的培養基在體外培養毛乳頭細胞中的用途。

6.權利要求2-4任一項所述的試劑盒在體外培養毛乳頭細胞中的用途。

7.一種體外培養毛乳頭細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

利用權利要求1所述的培養基，培養CD133陽性毛乳頭細胞，

任選地，所述CD133陽性毛乳頭細胞來源于人頭皮或小鼠背部皮膚組織，

任選地，所述CD133陽性毛乳頭細胞是通過下列步驟獲得的：

從人頭皮或小鼠背部皮膚組織分離真皮細胞；

利用CD133抗體對所分離的真皮細胞進行分選，以便獲得所述CD133陽性毛乳頭細胞，

任選地，所述CD133抗體為APC-CD133抗體，

任選地，利用CD133抗體對所分離的真皮細胞進行分選進一步包括：

將所分離的真皮細胞懸浮于PBS中；

向所述培養基中添加APC-CD133抗體，任選地按照每100微升體系，每10⁶個細胞添加APC-CD133抗體1μg；以及

利用流式細胞儀分選CD133陽性毛乳頭細胞，

任選地，于37℃、5％CO₂的培養箱中進行所述培養，

任選地，培養CD133陽性毛乳頭細胞進一步包括：

每3天更換一次培養基，9-10天進行第一次傳代培養，培養至第3代。

8.一種毛乳頭細胞或其衍生物，其特征在于，是通過權利要求7所述的體外培養毛乳頭細胞的方法獲得的。

9.一種體外培養毛乳頭細胞的系統，其特征在于，包括：

分離裝置，所述分離裝置用于從人頭皮或小鼠背部皮膚組織分離真皮細胞；

分選裝置，所述分選裝置與所述分離裝置相連，并且適于利用CD133抗體從所分離的真皮細胞中分選CD133陽性毛乳頭細胞；以及

培養裝置，所述培養裝置與所述分選裝置相連，并且設置有權利要求1所述的培養基，用于對所述CD133陽性毛乳頭細胞進行培養，

任選地，所述CD133抗體為APC-CD133抗體，

任選地，所述分選裝置為流式細胞儀。

10.一種鑒定制劑對毛囊組織是否具有影響的方法，其特征在于，包括以下步驟：

將權利要求8所述的毛乳頭細胞或其衍生物與所述制劑接觸；以及

對接觸前后的毛乳頭細胞或其衍生物進行檢測，

其中，

基于所述毛乳頭細胞或其衍生物的形態變化，以及其干細胞特性和毛囊誘導能力標志物的表達變化，判斷所述制劑對毛囊組織是否具有影響。