[發明專利]春石斛蘭種苗的組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201210113266.8
• 申請日: 2012-04-17
• 公開（公告）號: CN103371100A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 殷麗青;湯桂鈞;周音;李秀芬;黃衛昌;胡永紅;將建平;劉炤;胡海鋒;范曉芬
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海開祺知識產權代理有限公司 31114
• 代理人: 費開逵

1.一種春石斛蘭種苗的組織培養快速繁殖方法，以春石斛蘭八分熟的蒴果種子為外植體，采用培養基誘導生成原球莖從而進行離體快速繁殖，具體包括以下步驟：

1)外植體的準備和消毒：將春石斛蘭人工授粉后進行套袋，90～110天后待其八分成熟，摘取其蒴果，在超凈工作臺上，用75％(體積比)酒精消毒30～60s后，再用15～20％(體積比)次氯酸鈉溶液浸泡、無菌水沖洗；

2)原球莖的誘導培養：用無菌吸水紙吸干消毒后的春石斛蘭蒴果表面水分，用解剖刀切開蒴果，挑取石斛蘭種子，接種于誘導培養基上進行暗培養，20～30d后轉移至光照下培養，繼續培養40-50d后逐漸萌發成圓錐狀的原球莖；

3)原球莖的增殖與分化：將原球莖轉接于增殖與分化培養基中，萌發、分化成大量不定芽；

4)壯苗與生根培養：將不定芽切成單芽，接種于壯苗與生根培養基中，培養得生根試管苗；

5)試管苗的移栽：將生根試管苗帶瓶蓋置于常溫條件下煉苗5～7d，打開瓶蓋再煉苗2～3d，將生根試管苗從培養瓶中輕輕取出，洗去基部殘留的培養基，移栽于以苔蘚為基質的穴盤，澆水后保持溫度25±2℃，空氣濕度70～80％。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的春石斛蘭八分熟的蒴果種子，其個體大小接近成熟的春石斛蒴果，顏色為青綠色，種殼不硬、不裂開。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的誘導培養基配方為：MS+BA?0.2～2.0mg/L+NAA?0.05～0.5mg/L+水解酪蛋白0.5～1.5g/L+香蕉泥20～80g/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉5.5～6.5g/L，pH＝5.4～5.6。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的暗培養溫度為24～26℃，黑暗，無光照。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，光照培養溫度為24～26℃，光照強度為1500～2500勒克斯。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的增殖與分化培養基配方為：MS+6-BA?0.5～1.0mg/L+KT?0.2～0.5mg/L+NAA?0.1～0.2mg/L+水解酪蛋白0.5～1.5g/L+香蕉泥20～80g/L+蔗糖30～40g/L+瓊脂粉5.5～6.5g/L，pH＝5.4～5.6。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的壯苗與生根培養基培養為：1/2MS+6-BA?0.1～0.2mg/L+IBA?0.5～1.5mg/L+香蕉泥20～30g/L+蔗糖20～30g/L，pH＝5.4～5.6。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)、步驟4)是在光照下培養。