[發明專利]一種哈茨木霉Sch234菌株及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210112622.4
• 申請日: 2012-04-17
• 公開（公告）號: CN103374527A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 姜道宏;程家森;付艷蘋;謝甲濤;吉悅
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P3/00;C12R1/885
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明屬于植物病害生物防治技術領域，具體涉及一種用于水稻紋枯病和油菜菌核病生物防治的菌株茨木霉Sch234菌株，同時還涉及一種生防菌哈茨木霉Sch234菌劑的制備方法，還涉及一種哈茨木霉Sch234菌株在制備治療或預防水稻紋枯病和油菜菌核病藥物中的應用。

背景技術

植物在生長過程中會感染多種病害，使產量和質量受到不同程度的降低。引起植物病害的病原菌絕大多數為真菌，它們造成85％以上植物病害，如水稻的稻瘟病、紋枯病、小麥銹病、白粉病、油菜菌核病等重要作物的危害最為嚴重的病害均由真菌引致。對于植物真菌病害，通常采用抗病品種、種子處理與化學藥劑相結合的綜合防治措施進行治理，此策略在多數真菌病害的防治中取得了令人滿意的效果。但對一些特殊的病害，卻難以奏效，如立枯絲核菌(Rhizoctonia?solani?Kühn)引起的水稻紋枯病和核盤菌(Sclerotinia?sclerotiorum)引起的油菜菌核病等。此類病害防治的難題在于，首先，病原菌可以產生抗逆性極強的休眠結構-菌核，菌核在土壤中可以長期存活，難以防除；其次，對此兩種病害，寄主群體中均沒有可以利用的抗病種質資源；第三兩種病害菌發生于作物生長中后期的莖稈，由于生長后期作物封行，人在田中行動不便，為化學農藥的施用帶來極大的困難，并且藥劑難以到達發病部位-莖稈。針對此類對生產危害大、防治困難的病害，生物防治是極有潛力的防治途徑。人們嘗試使用多種生防真菌寄生土壤中存活的菌核，以降低病害的發生，如王艷麗嘗試利用哈茨木霉TC₃和NF₉菌株防治水稻紋枯病(王艷麗等，植物保護細胞，2000，27(2)：97-101)、國內外多名學者報道、應用盾殼霉對油菜菌核病的防治作用(姜道宏等，華中農業大學學報，1996，15(3)229-232；Whipps&Gerlagh，Mycol?Res，11：897-907；Jones?et?al，Mycol?Res，2003，107，267-276；Li?et?al，Eur?J?Plant?Pathol，2006，114，345-355)，營翠玲等初步研究了四種木霉對核盤菌的抑制作用(曹翠玲等，仲愷農業技術學院學報，2005，18(4)：21-24)等。本發明報道一株對水稻紋枯病和油菜菌核病均有顯著防治效果的哈茨木霉菌株及其在病害防治水稻紋枯病和油菜菌核病中的應用。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，在于提供了一種生防菌哈茨木霉Sch234菌株，是分離篩選一種對油菜菌核病病菌核盤菌(Sclerotinia?sclerotiorum)和水稻紋枯病菌(Rhizoctonia?solani)均具有顯著寄生作用的生防菌株-哈茨木霉Sch234菌株。使用該菌株制備的菌劑防治大田水稻紋枯病，防治效果可以達到83％。使用微生物菌劑防治植物病害，消弱了化學藥劑對環境的破壞以及人類身體健康的影響，可以實現農業、人類和環境的和諧、可持續發展。

本發明的另一個目的在于提供了一種生防菌哈茨木霉Sch234菌劑的制備方法，該方法原材料來源廣，制備過程簡單，產量高，分生孢子產量可以達到5.2×10¹⁰/g干培養料；制備工藝可以滿足規模化生產以實現大田病害防治的需求。

本發明的再一個目的是在于提供了一種哈茨木霉Sch234菌株在制備治療或預防水稻紋枯病和油菜菌核病藥物中的應用，在水稻插秧前一個月，按每畝800g制備的菌劑拌細土撒施稻田，進行土壤處理，可以獲得理想的發病效果；其優點在于省時省工，無需在水稻拔節后下稻田進行施藥處理。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術方案：

一種哈茨木霉菌株的分離與獲得，其步驟如下：

從四川省達州地區感染菌核病的油菜莖稈中采集核盤菌菌核，將菌核在無菌水中浸泡1min，然后半浸入滅菌的濕沙中，25℃孵育20天。將菌核上長出的真菌孢子在PDA平板上進行劃線培養，并進行單孢純化；根據形態學特征和ITS?DNA序列進行鑒定。

一種哈茨木霉Sch234菌劑的制備方法，其步驟如下：

(1)先將哈茨木霉菌株Sch234在PDA平板上于26-30℃活化2-4d，再接種到PDA斜面，27-29℃培養4-6d，加入滅菌去離子水，制備孢子懸浮液，添加吐溫-20，使孢子懸浮液中的吐溫-20的終濃度為0.025％，調整使孢子懸浮液濃度達到1.5×10⁶/ml；