[發(fā)明專利]重組輪狀病毒VP6載體蛋白及其制備

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210112598.4
• 申請(qǐng)日: 2012-04-17
• 公開（公告）號(hào): CN102643335A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳元鼎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C07K14/14
• 分類號(hào): C07K14/14;C12N15/46;C12N15/70
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種載體蛋白，尤其是一種重組的輪狀病毒TB-Chen株VP6載體蛋白及其制備，屬于醫(yī)學(xué)生物技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

輪狀病毒（Rotavirus，簡(jiǎn)稱RV）是嬰幼兒腹瀉的主要病原體。世界范圍內(nèi)每年大約有60多萬例RV感染患者死亡，其中80%發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家。RV屬呼腸病毒科（Reoviridae），輪狀病毒屬（Rotavirus）。RV基因組由11個(gè)片段的雙鏈RNA組成，分別編碼6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(VP1-VP4,?VP6和VP7)和6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP1-NSP5/NSP6)。?

根據(jù)RV組（亞組）抗原蛋白VP6的抗原性的不同，可將至今已發(fā)現(xiàn)的輪狀病毒RV分為A～G?七個(gè)組，?A組是嬰幼兒腹瀉的主要病原體。根據(jù)病毒蛋白編碼框（ORF）核苷酸序列同源性差異，可將A組輪狀病毒RV?的12個(gè)蛋白（基因）分為不同的基因型。根據(jù)RV基因型分類標(biāo)準(zhǔn)，A組輪狀病毒RV的結(jié)構(gòu)蛋白VP6至少可分為16個(gè)基因型（I1-I16型）。VP6蛋白由第6基因片段編碼，含397個(gè)氨基酸，分子量約為44.8KDa。VP6蛋白是輪狀病毒RV中含量最豐富的蛋白，約占病毒總蛋白量的51%。?RV內(nèi)殼中間層由260個(gè)致密的VP6蛋白三聚體共780個(gè)蛋白分子構(gòu)成。?

VP6蛋白具有重要的生物學(xué)功能，是病毒基因組轉(zhuǎn)錄和病毒組裝不可缺少的成分。VP6蛋白也具有重要的免疫學(xué)性質(zhì)。近年進(jìn)行的VP6蛋白免疫學(xué)研究表明，一些抗VP6蛋白的IgA單克隆抗體諸如7D9所產(chǎn)生的IgA具有保護(hù)作用，在SCID鼠中可清除其慢性RV病毒感染。一些研究表明VP6蛋白的抗病毒作用可能是通過IgA的分泌途徑而阻礙了病毒的復(fù)制循環(huán)過程，或作為一種黏膜的分泌型IgA，將RV感染的上皮細(xì)胞排除，從而起到保護(hù)作用。研究發(fā)現(xiàn)VP6蛋白分子中至少存在兩個(gè)Th細(xì)胞抗原表位和一個(gè)交叉反應(yīng)的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)表位?。有研究表明在使用麥芽糖結(jié)合VP6蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行黏膜免疫后，IFN-γ被認(rèn)為是CD4⁺T細(xì)胞分泌的唯一有效的抗RV的細(xì)胞因子。眾多的實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)VP6蛋白免疫后，在動(dòng)物體內(nèi)確實(shí)能引起抗RV感染的作用。抗VP6蛋白單克隆抗體具有抑制病毒轉(zhuǎn)錄活性和保護(hù)小鼠免受病毒感染的作用。用重組表達(dá)的VP6蛋白免疫小鼠，也可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生免疫保護(hù)作用。?

VP6蛋白可自我組裝成病毒樣顆粒（VLPs）。由于VLPs沒有感染性，在研究細(xì)胞相互作用，開發(fā)診斷制劑和疫苗方面，具有更好的安全性。與單一分子的重組抗原相比，VLPs具有更好的免疫原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。由于VLPs具有高密度的呈遞抗原表位，可產(chǎn)生很強(qiáng)的免疫反應(yīng)，是許多疫苗研制中很有前景的材料。?

輪狀病毒TB-Chen株是從臨床胃腸炎患者中分離得到的公知輪狀病毒株，是我國(guó)第一株完成了全基因組分析的A組人輪狀病毒RV株，輪狀病毒TB-Chen株全稱為：RVA/Human-wt/CHN/TB-Chen/1996/G2P[4]。這是一個(gè)公知的具有很好基礎(chǔ)研究和開發(fā)應(yīng)用價(jià)值的病毒株。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種重組輪狀病毒VP6載體蛋白。?

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種重組輪狀病毒VP6載體蛋白的制備方法。?

本發(fā)明提供的是這樣一種重組輪狀病毒VP6載體蛋白，其特征在于重組輪狀病毒VP6載體蛋白編碼基因上有下列六個(gè)供外源抗原表位基因插入的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)：Sac?I（gagctc），BspT104?I（ttcgaa），Kpn?I（ggtacc），Bln?I（cctagg），Sac?II（ccgcgg），Xho?I（ctcgag），其中：?

重組輪狀病毒VP6載體蛋白編碼基因的核苷酸序列如下：

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