[發(fā)明專利]人精子特異性轉(zhuǎn)移因子口服制劑及其制備工藝

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210112274.0
• 申請日: 2012-04-17
• 公開（公告）號: CN102626422A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周建偉;孔翠
• 申請（專利權(quán)）人: 周建偉
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K39/39;A61P15/18
• 代理公司: 濟(jì)寧宏科利信專利代理事務(wù)所 37217
• 代理人: 樊慶年

1.?人精子特異性轉(zhuǎn)移因子口服制劑及其制備工藝，其特征在于采用以下技術(shù)方案：

免疫原的制備

取健康人的精子，以無菌生理鹽水洗滌3次后，配制成濃度為4.0×106/ml?的混懸液，在-4℃以超聲細(xì)胞粉碎儀破碎完全，儲存于-20℃冰箱，備用；

免疫動(dòng)物?

（1）免疫前觀察及檢測

免疫前3d，5只白兔均精神好、進(jìn)食正常、無腹瀉；抽取靜脈血，以試管凝集法檢測布氏桿菌抗體，效價(jià)均小于1：80；

（2）免疫白兔

以配制好的人精子抗原懸液免疫白兔，每周一次，免疫方式為背部、腹部、頸部及腋下多點(diǎn)皮下注射，第一次免疫劑量為免疫原1ml+弗氏完全佐劑0.5ml+弗氏不完全佐劑0.5ml；第二次和第三次僅注射2ml精子抗原懸液；第四次、第五次也是僅注射4ml精子抗原懸液；

（3）一般情況觀察

每天觀察免疫后白兔的精神、進(jìn)食、有無腹瀉等狀況，以及注射局部有無潰瘍、壞死；

（4）抗體效價(jià)檢測

????末次免疫后一周，抽取白兔靜脈血，以試管凝集試驗(yàn)檢測血清中的精子抗體效價(jià)，達(dá)到1：1280為免疫成功；

制備人精子特異性轉(zhuǎn)移因子?

（1）取材、勻漿：末次免疫后第10天處死白兔，取脾臟及淋巴結(jié)置于-20℃冰箱備用；

取免疫的白兔脾臟，剪去筋膜和大血管，用無菌生理鹽水沖洗，以12000r/min低溫勻漿2次，每次1min，制備勻漿液；

（2）破碎、凍融、透析：?將勻漿液置于滅菌塑料離心管中，用超聲細(xì)胞破碎儀破碎，取破碎液計(jì)數(shù)殘存細(xì)胞，鏡檢確定破碎完全后，則將其置于冰箱冷凍4～6h，然后取出置于37℃水浴，完全融解后再冷凍，連續(xù)6次，最后裝入10KD透析袋中，以兩倍量的無菌雙蒸水透析48小時(shí)，24小時(shí)換液一次，期間振動(dòng)透析袋6次，收集透析液，以0.22μm濾器過濾除菌；

（3）檢定和分裝：多肽含量測定（改良Lowry法）后，按1mg/ml多肽為1個(gè)單位，每小瓶分裝2ml；儲存于-20℃冰箱備用。