[發(fā)明專利]動物α干擾素和γ干擾素的表達方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210110533.6
• 申請日: 2012-04-13
• 公開（公告）號: CN102628062A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發(fā)明（設計）人: 張志芳;李金祥;李軼女;易詠竹;劉興健;張金衛(wèi);丁農(nóng);鐘魯龍;王國增;沈桂芳
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12N15/866
• 分類號: C12N15/866;C07K14/56
• 代理公司: 北京市德權(quán)律師事務所 11302
• 代理人: 余光軍

1.一種干擾素的表達方法，其特征在于，包括：將人或同種動物的α干擾素和γ干擾素在昆蟲桿狀病毒生物反應器中進行聯(lián)合表達或共表達。

2.按照權(quán)利要求1所述的表達方法，其特征在于，將人或同種動物的α干擾素和γ干擾素在昆蟲桿狀病毒生物反應器中進行聯(lián)合表達的方法包括：(1)將人或同種動物的α干擾素基因和γ干擾素基因聯(lián)合在一起后重組到桿狀病毒的復制或感染的非必須基因位點上，獲得重組桿狀病毒；(2)用重組桿狀病毒感染昆蟲宿主或昆蟲細胞，表達外源基因，得到α干擾素和γ干擾素聯(lián)合表達的產(chǎn)物。

3.按照權(quán)利要求2所述的表達方法，其特征在于：步驟(1)中通過SEQ?ID?No.3所示的核苷酸序列將人或同種動物的α干擾素基因和γ干擾素基因連合在一起。

4.按照權(quán)利要求2所述的表達方法，其特征在于，步驟(1)中通過以下方式將聯(lián)合在一起的基因重組到桿狀病毒的復制或感染的非必須基因位點上：將聯(lián)合在一起的α干擾素基因和γ干擾素基因克隆到桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體上，獲得重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體；將重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體與桿狀病毒在昆蟲細胞中進行重組，將聯(lián)合在一起的α干擾素基因和γ干擾素重組到桿狀病毒的復制或感染的非必須基因位點上。

5.按照權(quán)利要求4所述的表達方法，其特征在于：所述的桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體為pVL1393載體；將聯(lián)合在一起的α干擾素基因和γ干擾素重組到桿狀病毒的多角體基因位點上。

6.按照權(quán)利要求1所述的表達方法，其特征在于，所述的將人或同種動物的α干擾素基因和γ干擾素基因在昆蟲桿狀病毒生物反應器中進行共表達的方法包括以下步驟：(1)將人或同種動物的α干擾素基因和γ干擾素基因分別重組到桿狀病毒的復制或感染的兩個非必須基因位點上，獲得重組桿狀病毒；(2)將重組桿狀病毒感染昆蟲宿主或昆蟲細胞，表達外源基因，得到α干擾素和γ干擾素共表達的產(chǎn)物。

7.按照權(quán)利要求6所述的表達方法，其特征在于，步驟(1)中按照以下方式將人或同種動物的α干擾素基因和γ干擾素基因分別重組到桿狀病毒的復制或感染的兩個非必須基因位點上，獲得重組桿狀病毒：將γ干擾素基因同增強型綠色熒光蛋白標記基因連接一起，將其重組到ReBm-dcc-d1629-d10桿狀病毒穿梭載體的p10基因位點上，通過EGFP的表型篩選出重組載體；將EGFP標記基因敲掉，獲得重組了γ干擾素的缺陷型桿狀病毒穿梭載體；將α干擾素基因重組到含有ORF1629同源臂的桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體中，獲得重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體；將重組了γ干擾素的缺陷型桿狀病毒穿梭載體與重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體共轉(zhuǎn)染家蠶細胞，獲得重組桿狀病毒。

8.按照權(quán)利要求6或7所述的表達方法，其特征在于：將α干擾素重組到桿狀病毒的多角體基因位點上，將γ干擾素重組到桿狀病毒的p10基因位點上。

9.按照權(quán)利要求1所述的表達方法，其特征在于：所述的動物包括豬、犬或雞；優(yōu)選的，所述豬α干擾素基因的核苷酸序列為SEQ?ID?No.1或SEQ?ID?No.9所示，豬γ干擾素的核苷酸序列為SEQ?ID?No.2所示；犬α干擾素的核苷酸序列為SEQ?ID?No.5所示，犬γ干擾素的核苷酸序列為SEQ?ID?No.6所示；雞α干擾素的核苷酸序列為SEQID?No.7所示，雞γ干擾素的核苷酸序列為SEQ?ID?No.8所示。

10.一種豬α干擾素突變體，其特征在于：其氨基酸序列為SEQ?ID?No.10所示。