[發明專利]具有pH敏感特性的抗酸納米口服DNA抗腫瘤疫苗及制備方法

無效

• 申請號: 201210109630.3
• 申請日: 2012-04-14
• 公開（公告）號: CN102614527A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 劉賾;譚小月;劉淑;熊敏;呂丹;向榮
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K39/00;A61K9/10;A61K47/36;A61P35/00
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

1.具有pH敏感特性的抗酸納米顆粒口服DNA抗腫瘤疫苗，其特征在于該疫苗是通過利用海藻酸對殼聚糖納米顆粒進行修飾，使殼聚糖納米顆粒具有pH敏感性，然后將編碼腫瘤特異性抗原Legumain蛋白的DNA質粒裝載到修飾后的殼聚糖納米顆粒而制成；在疫苗通過胃液時保護DNA質粒不被降解，并在腸道中形成松散的結構，利于樹突細胞及巨噬細胞吞噬，高效表達編碼的基因；同時有效激發CD8⁺T細胞介導的免疫反應，降低調節T細胞對免疫系統的抑制作用，對腫瘤細胞進行殺傷，延緩腫瘤細胞的生長與轉移。

2.如權利要求1所述的具有pH敏感特性的抗酸納米顆粒口服DNA抗腫瘤疫苗的制備方法，其特征是具體步驟為：

第1、殼聚糖納米顆粒的制備

第1.1、將分子量在28000至32000的長鏈殼聚糖溶解于雙蒸水中，并調節pH值到5.2，在55℃下攪拌30分鐘，形成A液；

第1.2、同時將25mM?Na₂SO₄溶液與DNA質粒混合加熱至55℃，勻速攪拌30分鐘，形成B液；

第1.3、隨后將A液與B液以體積比1∶1混合兩種溶液，并馬上進行混合，5分鐘后將制備好的殼聚糖納米顆粒保存在4℃；

第2、海藻酸側鏈上的羧基的活化

將海藻酸粉末溶解到雙蒸水中，并且將海藻酸溶液與加入的N-羥基琥珀酰亞胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽按摩爾比1∶5∶5混合，并將pH值調節到9.0，室溫攪拌過夜，活化后的海藻酸置于4℃保存待用；

第3、將第2步中活化的海藻酸與第1步中的殼聚糖納米顆粒按1∶1的體積比混合，并調節pH值到6.0，室溫20rpm，攪拌4～6小時，得到的產物放置4～7℃保存；

第4、將第3步中制備的納米顆粒進行離心，12000rpm，10分鐘，所得到的納米顆粒將沉于離心管的底部，棄上清，并將納米顆粒重懸于PBS緩沖液中，4～7℃保存，即得到具有pH敏感特性的抗酸納米顆粒口服DNA抗腫瘤疫苗。