[發(fā)明專利]一種通過(guò)孢子分離來(lái)制作蟲草第一代母種的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210109076.9
• 申請(qǐng)日: 2012-04-12
• 公開（公告）號(hào): CN102626035A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何寒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 何寒
• 主分類號(hào): A01G1/04
• 分類號(hào): A01G1/04;C05G1/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種通過(guò)孢子分離來(lái)制作蟲草第一代母種的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)孢子采集的容器選擇：選用瓶口直徑約6～8cm的廣口培養(yǎng)皿或平底罐頭瓶作為孢子采集容器；

(2)1000毫升培養(yǎng)基的原料組成及制備方法：馬鈴薯250克、葡萄糖20克、蠶蛹粉20克、瓊脂20克、蛋白胨5克、酵母膏(粉)6克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂1克、VB₁5片、VB₆1片、VB₁₂1片、水1000ml；制備過(guò)程是首先將馬鈴薯削好皮并洗干凈，切成厚度為3～4毫米的片狀，然后同時(shí)和1000ml水放入鍋中加熱煮沸到馬鈴薯酥而不爛，再通過(guò)過(guò)濾取得澄清液；接著依次往澄清液添加葡萄糖、蠶蛹粉、瓊脂、蛋白胨、酵母膏(粉)、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、VB₁、VB₆、VB₁₂，并將溶液的PH調(diào)節(jié)至6.5～7，最后再次加熱至溶液沸騰而得培養(yǎng)基；

(3)培養(yǎng)基裝瓶滅菌：趁熱將培養(yǎng)基分裝于各孢子采集容器瓶里，培養(yǎng)基裝入瓶中的厚度為0.5～0.8cm，瓶口安置上孢子分離所用的不銹鋼鐵鉤，瓶口先用13～15cm見方的高密度無(wú)紡布密封并扎上橡皮圈，再蓋上13～15cm見方的聚丙烯薄膜再扎上第二道橡皮圈封口防水，然后按常規(guī)滅菌后冷卻，使培養(yǎng)基凝固于瓶中；

(4)用于孢子分離的子實(shí)體選擇：選取能代表原始菌株性狀、健壯、產(chǎn)量高、形態(tài)好、孢子個(gè)頭大、即將成熟的蟲草子實(shí)體用于孢子分離；

(5)子實(shí)體上瓶：在無(wú)菌環(huán)境下用鑷子夾斷子實(shí)體，夾取子實(shí)體孢子頭部，將孢子頭直接插于安置在瓶口的不銹鋼鐵鉤上，封好無(wú)紡布蓋，在封薄膜時(shí)不要全封，留一個(gè)小指頭大小的透氣的角孔；

(6)孢子分離：將子實(shí)體已經(jīng)上瓶的瓶子放于溫度是22～23℃、空氣相對(duì)濕度是75～80％、光照是300lx的環(huán)境中培養(yǎng)，3～4天后原先光潔的培養(yǎng)基表面會(huì)有孢子菌落出現(xiàn)，隨后的幾天會(huì)在培養(yǎng)基表面長(zhǎng)滿白色菌絲；

(7)菌絲轉(zhuǎn)管提純：在培養(yǎng)基表面基本布滿白色菌絲時(shí)，在無(wú)菌環(huán)境下將菌絲轉(zhuǎn)接于試管斜面上進(jìn)行提純，提純時(shí)在培養(yǎng)基表面的菌絲生長(zhǎng)均勻處用接種針(鉤)挑取0.3～0.5cm見方且?guī)囵B(yǎng)基的菌絲體，轉(zhuǎn)接于試管斜面上，并按常規(guī)培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿試管斜面；

(8)試管種轉(zhuǎn)色貯存：將通過(guò)轉(zhuǎn)管提純且菌絲長(zhǎng)滿試管斜面的試管放置在溫度是22～23℃、空氣相對(duì)濕度是75～80％、光照是200～300lx的環(huán)境中培養(yǎng)，并培養(yǎng)至試管內(nèi)菌絲的色澤轉(zhuǎn)變?yōu)榻奂t色，將轉(zhuǎn)色正常、無(wú)污染的試管母種放置于冰箱2～4℃環(huán)境中冷藏貯存。