[發(fā)明專利]微生物發(fā)酵生產(chǎn)低溫殼聚糖酶的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210108731.9
• 申請日: 2012-04-13
• 公開（公告）號: CN102653749A
• 公開（公告）日: 2012-09-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 遲乃玉;張慶芳;王曉輝;竇少華;于爽;崔愛萍
• 申請（專利權(quán)）人: 大連大學(xué)
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42
• 代理公司: 大連智慧專利事務(wù)所 21215
• 代理人: 劉琦

1.一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)低溫殼聚糖酶的方法，其包括以下步驟：

(1)將產(chǎn)生殼聚糖酶的微生物逐級低溫馴化，馴化溫度由高到低，25℃→22℃→20℃→18℃→16℃→14℃→12℃→10℃，使其在低溫環(huán)境中生長良好；

(2)按常規(guī)方法將低溫馴化后的殼聚糖酶產(chǎn)生菌在10～16℃逐級擴(kuò)大培養(yǎng)，制備成液體一級種子和二級種子；

(3)將液體一級種子或二級種子，按發(fā)酵液體積的3～9％接種量接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在10～16℃培養(yǎng)72～144h時(shí)，即微生物發(fā)酵生產(chǎn)低溫殼聚糖酶結(jié)束；

(4)將(3)的發(fā)酵液在4,000～8,000rpm離心收集液體，收集到的液體即為粗酶液；

(5)根據(jù)不同需要和使用對象不同，將(4)得到的粗酶液進(jìn)一步濃縮、分離純化，制備成不同活性、純度和劑型的酶制劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，在步驟(5)之后進(jìn)一步包括：將步驟(5)得到的粗酶液進(jìn)一步濃縮、分離純化，制備成不同活性、純度和劑型的酶制劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中菌種低溫馴化培養(yǎng)基、液體種子培養(yǎng)基、發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基分別為：

(1)菌種低溫馴化培養(yǎng)基：蛋白胨7.0～13.0g，酵母提取物3.0～7.0g，葡萄糖1.5～2.5g，NaCl?3.0～7.0g，蒸餾水1.0L，pH值自然，121℃高壓蒸汽滅菌30min。

(2)液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖1.5～2,5g，蛋白胨8.0～12.0g，酵母提取物3.0～7.0g，K₂HPO₄?0.5～0.9g，KH₂PO₄?0.1～0.5g，NaCl?3.0～7.0g，MgSO₄·7H₂O?0.4～0.6g，自來水1.0L，pH值自然，121℃高壓蒸汽滅菌30min。

(3)發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基：殼聚糖5.0～15.0g，葡萄糖1.0～4.0g，蛋白胨5.0～15.0g，酵母提取物3.0～8.0g，K₂HPO₄?0.5～0.9g，KH₂PO₄?0.1～0.6g，NaCl?3.0～7.0g，MgSO₄·7H₂O?0.2～0.6g，自來水1.0L，pH值自然，121℃高壓蒸汽滅菌30min。