[發(fā)明專利]玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210108438.2
• 申請日: 2012-04-14
• 公開（公告）號: CN102586470A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設計）人: 劉銅;侯巨梅;左豫虎;慕慶峰;馬柄辰
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農(nóng)墾大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱東方專利事務所 23118
• 代理人: 曹愛華

1.一種玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測試劑盒，其特征在于：這種玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測試劑盒包含2套PCR反應體系，第一套反應體系包括由二條特異性引物SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:3組成的第一對引物對，第二套反應體系包括由二條特異引物SEQ?ID?NO:2和SEQ?ID?NO:3組成的第二對引物對，二對引物對引物序列和組合方式如下：

第一對：上游引物5`-ACGGAGGATGCGGTATGG-3`???（SEQ?ID?NO:1）

????????下游引物5`-CCTCGGAATCGTGCTTTT-3`???（SEQ?ID?NO:3）

第二對：上游引物5`-GGGGCTCGCAGGCTAATGT-3`??（SEQ?ID?NO:2）

????????下游引物5`-CCTCGGAATCGTGCTTTT-3`???（SEQ?ID?NO:3）。

2.根據(jù)權利要求1所述的玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述的每套反應體系還包含PCR反應緩沖液、Mg2+、dNTP和?Taq酶。

3.根據(jù)權利要求1所述的玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述的第一套反應體系由以下組分組成：以1ml溶液計，100μl?10×PCR?反應緩沖液，?20?μl?濃度為10mM?的dNTP，?200單位Taq酶，濃度為10mM?10mM的第一對上、下游引物各40?μl?，余量為超純水。

4.根據(jù)權利要求1所述的玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述的第二套反應體系由以下組分組成：以1ml溶液計，100μl?10×PCR?反應緩沖液，?20?μl?濃度為10mM?的dNTP，?200單位Taq酶，濃度為10mM?10mM的第二對上、下游引物各40?μl?，余量為超純水。

5.根據(jù)權利要求1所述的玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述的玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測試劑盒還包括有說明書。

6.一種權利要求3或4所述的玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于：

一、用PCR檢測試劑盒中第一套PCR反應體系,?對樣品進行第一次PCR擴增，獲得PCR擴增產(chǎn)物；

二、取測定步驟一獲得的PCR擴增擴物用無菌水按1：50稀釋，然后取1微升稀釋產(chǎn)物作為擴增模板，以上述的PCR檢測試劑盒中的第二套PCR反應體系，對所述樣品進行第二次PCR擴增，獲得PCR擴增產(chǎn)物；若產(chǎn)物中存在827bp?的DNA片段，則表明所述樣品中有玉米彎孢葉斑病菌。

7.根據(jù)權利要求6所述的玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測試劑盒的檢測方法，，其特征在于：所述的樣品是病原菌的分子孢子和病原菌菌絲的DNA提取物。

8.根據(jù)權利要求6所述的玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測試劑盒的檢測方法，，其特征在于：所述的樣品是玉米葉片組織的DNA提取物。

9.一種玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測方法，其特征在于：這種玉米彎孢葉斑病菌PCR檢測方法包括使用二對特異性引物對，其中第一對引物對由二條特異性引物SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:3組成，其中第一對引物對由二條特異性引物SEQ?ID?NO:2和SEQ?ID?NO:3組成，其引物序列和組合方式如下：

第一對：上游引物5`-ACGGAGGATGCGGTATGG-3`???（SEQ?ID?NO:1）

????????下游引物5`-CCTCGGAATCGTGCTTTT-3`???（SEQ?ID?NO:3）

第二對：上游引物5`-GGGGCTCGCAGGCTAATGT-3`??（SEQ?ID?NO:2）

????????下游引物5`-CCTCGGAATCGTGCTTTT-3`???（SEQ?ID?NO:3）。