[發(fā)明專利]一種海洋低溫蛋白酶MP水解發(fā)制品脫鱗的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210107520.3
• 申請日: 2012-04-13
• 公開（公告）號: CN103374822A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郝建華;王躍軍;孫謐;劉均忠
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號: D06M16/00
• 分類號: D06M16/00;D06M11/155;D06M15/53;D06M101/12
• 代理公司: 北京法思騰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11318
• 代理人: 史和初;楊小蓉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及發(fā)制品加工領(lǐng)域，具體的說是涉及一種海洋低溫蛋白酶MP水解發(fā)制品脫鱗的方法。

背景技術(shù)

我國人發(fā)制品業(yè)發(fā)展歷史淵源于二十世紀50年代，現(xiàn)已成為中國較為特色的傳統(tǒng)出口創(chuàng)匯項目，作為勞動密集型產(chǎn)業(yè)，對提高城鄉(xiāng)勞動就業(yè)率有積極貢獻。據(jù)海關(guān)統(tǒng)計，2010年我國發(fā)制品進出口總額為21.16億美元，與2009年同期相比增長21.9％。眾所周知，以東方人發(fā)為材料生產(chǎn)供歐美市場使用的發(fā)制品，需首先限制性破壞表面鱗質(zhì)層，使其達到所需求的柔軟程度，再以氧化手段脫除黑色素，進而生產(chǎn)出色發(fā)成品。然而人發(fā)鱗質(zhì)層的基礎(chǔ)成分是各種天然氨基酸組成的硬性角蛋白質(zhì)，這些天然的角蛋白屬不溶性蛋白質(zhì)，具有特殊的結(jié)構(gòu)，呈纖維狀，穩(wěn)定性高、彈性好、膨脹性小，是保持人發(fā)正常狀態(tài)的主要屏障。一般情況下，它既不溶于水、稀的酸和堿，也不為普通動物的胃蛋白酶所消化。故多年來發(fā)制品制造業(yè)均采用濃酸法進行發(fā)制品的脫鱗，但酸法水解存在諸多缺點，如：水解度難以控制，胱氨酸、色氨酸等被破壞后形成黑色不溶物沉積頭發(fā)表面，并伴有惡臭產(chǎn)生而嚴重污染環(huán)境，色發(fā)成品抗拉強度、保濕性及抗紫外線氧化性能大為降低等，嚴重影響色發(fā)成品的產(chǎn)品質(zhì)量和檔次，產(chǎn)品質(zhì)量合格率＜50％。椐了解對人發(fā)角蛋白質(zhì)最有效的商品水解酶是角蛋白酶，但試驗結(jié)果，角蛋白酶對人發(fā)表面鱗質(zhì)層缺乏滿意的作用專一性，易將其徹底水解成低聚肽和芳香族游離氨基酸，而無法實際應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中存在不足，在開發(fā)海洋微生物-海洋細菌YS-80低溫堿性蛋白酶基礎(chǔ)上，進一步開發(fā)提供一種海洋低溫蛋白酶MP水解發(fā)制品脫鱗的方法。

本發(fā)明提供的海洋低溫蛋白酶MP水解發(fā)制品脫鱗的方法，其特征在于包括下列步驟：

(1)、處理液的制備

處理液為氯化鈣0.1-0.3質(zhì)量％，pH?8-10的硼砂緩沖液，海洋低溫蛋白酶MP/發(fā)制品質(zhì)量百分比為2-5質(zhì)量％，優(yōu)選為3-3.5質(zhì)量％，滲透劑脂肪醇聚氧乙烯醚市售添加量為0.2-1.5質(zhì)量％；優(yōu)選為0.5-1.0質(zhì)量％；

(2)、水解脫鱗

發(fā)制品/處理液比例為8-15g/L，優(yōu)選為10-12g/L，反應(yīng)溫度為20-35℃，優(yōu)選為25-28℃，pH為7-10，優(yōu)選為8-9，水解脫鱗時間為7-9小時，優(yōu)選為7.5-8.5小時。

抗拉力強度測定

經(jīng)處理過的頭發(fā)，去掉發(fā)梢和發(fā)根后，將其剪成等長的兩段，對應(yīng)地分為兩組晾干，用DIANS-A頭發(fā)強度測定儀直接測定。

頭發(fā)防曬系數(shù)的測定

頭發(fā)用抗張強度試驗機拉伸，在屈服區(qū)內(nèi)應(yīng)力應(yīng)變曲線斜度的改變與紫外線照射量有關(guān)。以屈服斜度對數(shù)的負倒數(shù)(-1/ln)作為暴露時間的函數(shù)作圖時，在0～3h之間獲得一條直線。并模擬SPF，人為的劃分為15個標度，即″O″指定為3小時這個點，代表最大的損傷，“15”指定為沒有紫外線損傷的未暴露值。

本發(fā)明提供的海洋低溫蛋白酶MP水解發(fā)制品脫鱗的方法中，所述海洋低溫蛋白酶MP(或稱海洋低溫堿性蛋白酶MP)由海洋細菌YS-80發(fā)酵制備(由黃海所提供或可市售海洋所產(chǎn)品而得)。將海洋細菌YS-80(分離自深海海泥海洋細菌(YS-80)，保藏在中國武漢CCTCC，保藏號為CCTCC?NO：M209177，保藏證明已記載在專利申請?zhí)?00910177301.0)。在最適溫度(30℃)培養(yǎng)48h，海洋低溫蛋白酶MP分泌到培養(yǎng)基中，離心(如5000rpm，30分)發(fā)酵液棄去菌體。上清液在4℃用65wt％硫酸銨沉淀30分鐘，沉淀復(fù)溶于去離子水中，通過截留分子量為10kD的超濾膜濃縮上清液，凍干濃縮液，再在Tris緩沖液(10Mm?Tris，100Mm?NaCl，pH8.0)復(fù)溶凍干粉并用Superdex200(GE公司)分子篩凝膠柱層析純化得到純化的海洋低溫蛋白酶MP。隨著處理條件的變化其水解脫鱗效果有一定變化，但都能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明目的達到良好的脫鱗的效果，其中效果最優(yōu)的發(fā)制品脫鱗效果優(yōu)選為海洋低溫蛋白酶MP?3-3.5％(酶/發(fā)制品質(zhì)量百分比)、滲透劑脂肪醇聚氧乙烯醚0.5-1.0質(zhì)量％、25-28℃、pH?8-9條件下，發(fā)制品/處理液比例為10-12g/L時，處理7.5-8.5小時。人發(fā)經(jīng)海洋低溫蛋白酶MP酶法脫鱗處理后平均抗拉力強度達到140.8g，頭發(fā)防曬系數(shù)達到10.7以上，該方法工藝簡單，效果好，使得人發(fā)鱗片層水解脫落，提高色發(fā)成品的質(zhì)量和檔次，是一種比酸法脫鱗更有效的新穎發(fā)制品脫鱗酶法處理技術(shù)。

具體實施方式