[發明專利]抗耐草甘膦蛋白G2-aroA的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201210107179.1
• 申請日: 2012-04-12
• 公開（公告）號: CN102643786A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 韓庚辰;劉素霞;宋哲;李雪峰;李翔;姜付坤
• 申請（專利權）人: 北京奧瑞金種業股份有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/40;G01N33/577;G01N33/573
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種抗耐草甘膦蛋白G2-aroA的單克隆抗體及其應用。

背景技術

草甘膦類除草劑是一種廣譜性、非選擇性除草劑，它通過抑制EPSPS(5-烯醇丙酮酰草酸-3-磷酸合酶，是植物體內芳香族氨基酸合成途徑中的一個重要酶)的活性，阻斷了植物莽草酸途徑的生物合成，強烈抑制細胞分裂，對許多一年生和多年生雜草都具有強烈的抑制作用。由于草甘膦易于被微生物分解，在土壤中無殘毒，對動物無毒害，自從1976年Roundup研制成功以來，得到了廣泛的應用。但是，由于玉米等禾本科作物對草甘膦敏感，使其應用受到限制。因此，將耐草甘膦基因轉入作物，不但可以擴大草甘膦的使用范圍，而且可降低生產成本，保護作物免受藥害，最終達到增產增收的目的。

目前，國際上在耐草甘膦轉基因植物的研究方面，已經取得了突破性進展。美國孟山都(Mosanto)和Calegene等公司在基于對EPSP合成酶的編碼基因aroA的研究，已獲得耐草甘膦轉基因大豆、玉米、油菜和棉花等作物系列品種，其中大豆、玉米等多種轉基因作物已經進入商品化生產。Mosanto公司生產的耐草甘膦二型轉基因玉米在2007年的播種面積預計超過3200萬英畝，相當于美國玉米播種面積的40％。2004年，中國農業科學院生物技術研究所發現了一個新的耐草甘膦基因G2-aroA(中國專利，申請號03826892.2，授權公告號CN?100429311C)。目前尚沒有抗G2-aroA蛋白的單克隆抗體，也未見利用G2-aroA蛋白單克隆抗體鑒別轉G2-aroA基因植物的相關報道。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種抗耐草甘膦蛋白G2-aroA的單克隆抗體。該單克隆抗體由雜交瘤細胞株AntiG2-5F11產生。所述雜交瘤細胞株AntiG2-5F11在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC?No.5772。

由所述雜交瘤細胞株AntiG2-5F11?CGMCC?No.5772產生的單克隆抗體為抗耐草甘膦蛋白G2-aroA的單克隆抗體；所述G2-aroA蛋白的氨基酸序列為序列表中序列1。

本發明所提供的單克隆抗體的重鏈恒定區為IgG1型，輕鏈恒定區為κ型。

含有所述單克隆抗體的鑒別或輔助鑒別轉G2-aroA基因植物的Western?blot試劑盒也屬于本發明的保護范圍。所述G2-aroA基因編碼氨基酸序列為序列表中序列9的蛋白質。

所述單克隆抗體或所述Western?blot試劑盒在檢測或輔助檢測所述G2-aroA蛋白中的應用也屬于本發明的保護范圍。

所述單克隆抗體在制備檢測或輔助檢測所述G2-aroA蛋白的試劑盒中的應用也屬于本發明的保護范圍。所述試劑盒為Western?blot試劑盒。

所述單克隆抗體或所述Western?blot試劑盒在鑒別或輔助鑒別轉G2-aroA基因植物中的應用也屬于本發明的保護范圍；所述G2-aroA基因編碼氨基酸序列為序列表中序列9的蛋白質。

本發明的另一個目的是提供一種鑒別或輔助鑒別轉G2-aroA基因植物的方法。

該方法包括如下步驟：用所述單克隆抗體對待測植物蛋白樣品進行Western?blot，按照如下方法確定所述待測植物蛋白是否為轉G2-aroA基因植物：若所述待測植物蛋白樣品與所述單克隆抗體雜交產生大小為46KD的特異性條帶，則所述待測植物蛋白為轉G2-aroA基因植物或候選為轉G2-aroA基因植物，若所述待測植物蛋白樣品與所述單克隆抗體雜交未產生大小為46KD的特異性條帶，則所述待測植物為非轉G2-aroA基因植物或候選為非轉G2-aroA基因植物；所述G2-aroA基因編碼氨基酸序列為序列表中序列9的蛋白質。

在本發明的一個實施例中，所述待測植物具體為玉米，如玉米品種綜31。

本發明所提供的單克隆抗體對耐草甘膦蛋白G2-aroA具有較高的親和力和特異性；本發明所提供的單克隆抗體可用于檢測玉米等轉基因植物中耐草甘膦蛋白G2-aroA的表達情況，具有快速、靈敏、準確、特異性強、成本低的優點。

保藏說明

參椐的生物材料(株)：AntiG2-5F11

科學描述：小鼠雜交瘤細胞

保藏機構：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心

保藏機構簡稱：CGMCC

地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號

保藏日期：2012年2月7日