[發明專利]一種羊水與絨毛細胞培養基

無效

• 申請號: 201210107129.3
• 申請日: 2012-04-13
• 公開（公告）號: CN102618493A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 李錦明;秦清和
• 申請（專利權）人: 惠州鴻雨科技有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種羊水與絨毛細胞培養基，屬于細胞生物學領域

背景技術

近年來，由于環境壓力的日益增加，在群體中和遺傳有關的疾病的發生率明顯地上升。預防嚴重的先天畸形和遺傳疾病的發生，保證人類后代的健康和繁榮，是遺傳學和醫學的一項重要任務。產前診斷目前主要有孕早期絨毛組織取材，孕中期羊水和臍帶血、孕婦外周血分離胎兒細胞及植入前診斷等方法。但由于羊水穿刺檢查具有操作安全、妊娠流失率低于自然流產率以及診斷染色體異常較為可靠的特點，所以孕中期羊水細胞檢查仍是最主要的方法。

羊水穿刺檢查的主要對象是高齡(大于34歲)、不良接觸史、既往畸胎弱智分娩史、既往染色體異常兒分娩史、夫妻之一核型異常、B超示畸形、家族性連鎖遺傳病史、近親婚配等的孕婦。羊水細胞培養后通過染色體顯帶技術，能夠辨別三體綜合癥、平衡易位、倒位以及染色體異常等疾病，同時，還可以用于胎兒窘迫現象的判斷及確定胎兒成熟程度。

羊水穿刺屬于介入性產前診斷，每次抽取20ml羊水，占羊水總量的1/20～1/12，但羊水中活細胞少，培養周期長，無菌要求高，稍不注意即致失敗。即使培養成功，因分裂相少、形態不佳而達不到分析要求，無法進行進一步研究，使羊水產前檢測的應用受到限制。因此，成功的羊水細胞培養，除需要嚴格的試驗操作技術和經驗外，培養基的質量也是非常關鍵的。羊水細胞可能是胎兒皮膚、消化道、呼吸道及泌尿生殖道的脫落細胞，其中只有小部分是有活力的細胞(約0.1％)。

傳統的羊水細胞培養基組成是：基礎培養基(RPMI1640、DMEM或F12)+小牛血清(胎牛血清)。但這種培養基的成功率低于30％，而且平均培養周期在20天，且分裂相少，不能有效用于羊水細胞檢查；為了縮短羊水細胞培養周期，提高成功率，已有了改良型的培養基的研究報道，基本上是在培養基的基礎上添加含有生長因子的提取物組成。如Chang?HC(ChangHC，Jones?OW，Masui?H，Human?amniotic?fluid?cells?grown?in?ahormone-supplement?medium：suitability?for?prenatal?diagnosis，Proc.Natl.Acad.Sci.，Vol.79，4795-4799(1982))。在DMEM與F12按1∶1混合的基礎培養基(DMEM/F12)中添加10種促生長因子，分別為：轉鐵蛋白(transferrin)5mg/L、亞硒酸鈉20nMol/L、胰島素10mg/L、三碘甲狀腺氨酸(triiodothyronine)0.1nMol/L、胰高血糖素(glucagong)1mg/L、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)10、氫化可的松(hydrocortisone)1nMol/L、睪酮(testosterone)1nMol/L、雌二醇(estradiol)1nMol/L、孕酮(progesterone)1nMol/L。Chang?HC把含此10種促生長因子配方的培養基稱為H培養基，而將此10種促生長因子含量增倍后的培養基稱為H-1培養基。生長因子加倍的H-1培養基的培養效果要明顯好于H培養基，H-1在培養基添加較低含量的胎牛血清的情況下，依然能夠明顯增加羊水細胞的克隆形成率和克隆生長速度，使培養成功率達到99％以上，培養周期縮短到10天左右。

中國專利申請200910193962.2公開了一種羊水細胞培養基，包含下列組份：基礎培養基，轉鐵蛋白，亞硒酸鈉，胰島素，三碘甲氟腺氨酸，胰高血糖素，堿性成纖維細胞生長因子，氫化可的松，睪酮，雌二醇，孕酮，并在上述成分中加入了維生素E和L-抗壞血酸兩種抗氧化劑的混合物。該專利申請通過添加維生素E和L-抗壞血酸兩種抗氧化劑的混合物來達到增加體外增殖的羊水細胞克隆數目和細胞增殖速度，縮短培養周期的效果。

發明內容

本發明的目的是提供一種羊水與絨毛細胞培養基，它仍能夠顯著改進羊水細胞的培養效果，克隆形成率和克隆生長速度明顯增加，可減少培養時間(6--10天即可)，同時提高了細胞培養成功率，充分發揮了不同細胞生長因子的協同作用。

本發明的目的是提供一種羊水與絨毛細胞培養基及其配方，它含有較少種類的成分，使生產成本明顯降低。

為達到上述目的，本發明所采取的解決方案是：

具體方法如下：

一種羊水與絨毛細胞培養基，包含下列組份：基礎培養基，胎牛血清，生長因子，抗氧化劑、抗生素和緩沖系統。

一種羊水與絨毛細胞培養基，包含下列組分：