[發明專利]一種表達人抗體全基因的重組腺相關病毒(rAAV)載體及其方法

有效

• 申請號: 201210106947.1
• 申請日: 2012-04-12
• 公開（公告）號: CN102634542A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 曾毅;賈潤清;管永軍;余雙慶;周玉柏;馮霞
• 申請（專利權）人: 北京工業大學;曾毅;賈潤清;管永軍
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864;C12N15/66
• 代理公司: 北京金闕華進專利事務所(普通合伙) 11224
• 代理人: 吳鴻維

1.一種表達人抗體全基因的重組腺相關病毒(rAAV)載體，其特征在于，利用AAV2/1穿梭表達載體pSNAV構建而成。

2.如權利要求1所述的重組腺相關病毒(rAAV)載體，其特征在于該載體的ITR之間的序列為：5‘-ITR-promoterl-murine?IgG1?signal?peptide-L?chain-promoter2-murine?IgG1?signal?peptide-H?chain-SV40?polyA-ITR。

3.如權利要求1、2所述的重組腺相關病毒(rAAV)載體，其特征在于：在pSNAV的基礎上具有5‘-ITR-promoterl-murine?IgG1?signal?peptide-L?chain-promoter2-murine?IgG1?signal?peptide-H?chain-SV40?polyA-ITR-Ampicillin?resistance-ColE?ori-SV40啟動子-neo-SV40?Ploy?A的基因結構單元。

4.如權利要求2或3所述的重組腺相關病毒(rAAV)載體，其特征在于：所述的promoter1為：hEF-1α?promoter；所述的promoter2為hCMV?IE?promoter。

5.如權利要求1-4所述的重組腺相關病毒(rAAV)載體，其特征在于，該載體為pSNAV/eLcH，所表達的抗體為HIV人中和抗體2G12全基因。

6.一種構建表達人抗體全基因的重組腺相關病毒(rAAV)載體的方法，其具體構建方法為：

1)通過PCR的方法改造pSNAV載體，并在載體pSNAV的多克隆位點插入linker；

2)利用PCR技術擴增出hEF-1α?promoter、murine?IgG1?signal?peptide、目的抗體的輕鏈、hCMV?IE?promoter、murine?IgG1?signal?peptide、目的蛋白的重鏈、SV40?polyA等基因結構單元；

3)利用酶切位點將步驟2)中各結構單元順次連接，克隆到改造好的pSNAV載體的多克隆位點中，形成5‘-ITR-promoter1-murine?IgG1?signal?peptide-Lchain-promoter2-murine?IgG1?signal?peptide-H?chain-SV40?polyA-ITR的基因結構單元；

4)即得到重組腺相關病毒(rAAV)載體。

7.權利要求6所述的方法，其特征在于步驟4)中所述的載體為權利要求5所述的pSNAV/eLcH。