[發明專利]單分散聚甲基丙烯酸酯混合型陽離子交換層析介質在萬古霉素柱層析純化中的應用

無效

• 申請號: 201210103597.3
• 申請日: 2012-04-11
• 公開（公告）號: CN102603872A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 江必旺;陳榮姬;吳俊成;林生躍;肖書霞
• 申請（專利權）人: 蘇州納微生物科技有限公司
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/18
• 代理公司: 蘇州華博知識產權代理有限公司 32232
• 代理人: 傅靖

技術領域

本發明涉及抗生素純化領域，具體涉及萬古霉素的柱層析純化領域。

背景技術

萬古霉素是由放線菌屬微生物菌株產生的一種糖肽類抗生素，其可抑制細菌細胞壁合成以及改變細胞膜的滲透性，對抑制革蘭氏陽性菌如葡萄球菌、鏈球菌、梭狀芽胞桿菌感染引起的疾病有明顯療效，同時可用于治療對青霉素過敏或使用青霉素或頭孢菌素沒有效果的患者。

離子交換層析介質是是生物大分子分離純化中最常用的方法之一，廣泛應用于氨基酸、多肽、蛋白質、抗生素以及天然產物的分離純化。其主要由三部分組成，第一部分是母體結構，即載體；第二部分是固定在母體結構上的帶電功能基團；第三部分是與功能基團帶相反電荷的離子對。與傳統的離子交換樹脂相比，用于生物大分子分離的離子交換層析介質除了具備高的離子密度、具有一定的耐壓、耐酸堿性能外，還要求母體結構足夠親水，使其具有良好的生物相容性，并且要具有均勻的粒徑。目前用于生物大分子分離的介質大多數不具備所有的以上特點，在實際應用中具有缺陷。

Aya?Ohkubo等(Journal?of?Chromatography?A,?1997,779?113-122)使用硅膠為基質，鍵合強陽離子基團，合成強陽離子層析介質用于小分子的分離純化能達到很好的分離效果。但是硅膠基質不能耐堿性，這限制了它的應用范圍。

美國專利7018814公開了一種鹽酸萬古霉素的純化方法，該方法以強陽離子交換樹脂為分離介質，以氫氧化銨水溶液為流動相對萬古霉素進行粗提，回收率為88%。該方法使用的離子交換樹脂基質粒徑為50-200μM的不均勻微球，不能滿足精細純化要求。

中國專利200710187300.5公開了一種用葡聚糖基質的Sephadex?CM-25(GE?Healthcare)分離純化萬古霉素的方法，該方法以碳酸氫銨水溶液為流動相，能得到95%以上的純度，70%以上的回收率。但是該方法中使用的分離介質為葡聚糖基質，其在不同鹽濃度下床體積會發生非常明顯的變化，同時葡聚糖基質較軟，不耐高壓，這在快速的分離上有很大的局限。

Capto?MMC(GE?Healthcare)是一種復合型陽離子交換層析介質，由于其表面鍵合了包含疏水基團、離子交換基團以及氫鍵的復合配基，因此其具有不同于傳統生物分離離子交換層析介質的選擇性，以及更高的動態載量。但是，該介質使用的基質為瓊脂糖，其耐高壓性能較低，在高流速的操作下有一定的缺陷。

發明內容

本發明的目的是針對上述問題，提供一種能達到高純度和高回收率，而且柱層析不會隨著鹽濃度和流速的變化而發生變化，層析填料可耐高壓和高流速、并具備高載量的層析介質。

為實現上述目的，本發明提供的技術方案是，單分散聚甲基丙烯酸酯混合型陽離子交換層析介質在萬古霉素柱層析純化中的應用，采用單分散聚甲基丙烯酸酯混合型陽離子交換層析介質為填料的色譜柱進行柱層析。?

優選的，用所述單分散聚甲基丙烯酸酯混合型陽離子交換層析介質作為色譜柱的固定相，將含萬古霉素的樣品上樣在該色譜柱上，用鹽的水溶液作為流動相洗脫吸附在填料上的萬古霉素。

優選的，所述鹽的水溶液是NH₄HCO₃的水溶液。

優選的，所述單分散聚甲基丙烯酸酯基質混合型陽離子交換層析介質是由蘇州納微生物科技有限公司生產，產品型號為Uni?MSP-50S。

Uni?MSP-50S是在親水性的聚甲基丙烯酸基質表面鍵合上疏水基團和離子交換基團，其具備疏水和離子交換的雙重作用，因此做為柱層析填料時相比傳統離子交換層析介質具有更好的選擇性，而且填料床的體積不會隨流動相濃度發生變化，在純化萬古霉素時，只需要低鹽濃度鹽水溶液就可將吸附在填料上的萬古霉素洗脫下來，達到高純度及高回收率，同時，強耐反壓性能使其能夠在高流速下操作。

本發明的有益效果是：單分散聚甲基丙烯酸酯混合型陽離子交換層析介質Uni?MSP-50S不但利于以水溶液做流動相分離純化萬古霉素粗品，達到高純度和高回收率，而且柱層析不會隨著鹽濃度和流速的變化而發生變化，層析填料可耐高壓和高流速、并具備高載量，同時可使用低鹽濃度將吸附在層析柱上的萬古霉素洗脫下來。

附圖說明

圖1是實施例1中使用的蘇州納微生物科技有限公司單分散聚甲基丙烯酸酯混合型陽離子交換層析介質Uni?MSP-50S掃描電鏡照片。

圖2是實施例1中提純前的萬古霉素粗品的HPLC分析圖譜。