[發明專利]單分散聚甲基丙烯酸酯離子交換層析介質在磺達肝癸鈉柱層析純化中的應用

有效

• 申請號: 201210103572.3
• 申請日: 2012-04-11
• 公開（公告）號: CN102659859A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 江必旺;陳榮姬;吳俊成;林生躍;肖書霞
• 申請（專利權）人: 蘇州納微生物科技有限公司
• 主分類號: C07H15/04
• 分類號: C07H15/04;C07H1/06
• 代理公司: 蘇州華博知識產權代理有限公司 32232
• 代理人: 傅靖

技術領域

本發明涉及藥物純化領域，具體涉及磺達肝癸鈉的柱層析純化領域。

背景技術

磺達肝癸鈉（Fondaparinux?sodium）是戊聚糖鈉最小重復片段的五糖物質，它是一種活化凝血因子Ⅹa的特異性抑制劑，主要用于血栓栓塞疾病防治，它的應用在很大程度上解決了抗凝藥物一直以來困擾醫師的兩難問題——在抗凝強度和出血風險中找到一個平衡支點。

磺達肝癸鈉由人工合成，一般合成方法都需要經歷50個以上步驟，因此最后的粗品中雜質含量復雜，且磺達肝癸鈉有效含量較低（一般為60-80%），經過一步提取到高純度（98%以上）較困難。

離子交換層析介質是生物分子分離純化中最常用的方法之一，廣泛應用于抗生素、核酸、多肽、蛋白質、以及天然產物的分離純化。其主要由三部分組成，第一部分是骨架結構，即載體；第二部分是固定在母體結構上的帶電功能基團；第三部分是與功能基團帶相反電荷的離子對。與傳統的離子交換樹脂相比，用于生物大分子分離的離子交換層析介質除了具備高的離子密度、具有一定的耐壓、耐酸堿性能外，還要求母體結構足夠親水以消除其與生物分子的非特異性吸附，并且要具備均勻的粒徑。目前用于生物大分子分離的介質大多數不具備所有的以上特點，在實際應用中具有缺陷。

J.Hradil等（Reactive?Polymers,?1990,13,43-53）分別使用甲基丙烯酸環氧丙酯/乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚物(GMA/EDMA)和甲基丙烯酸羥乙酯/乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚物(HEMA/EDMA)為基質，合成粒徑分別為250-400μm和100-200μm強陰離子交換樹脂，相比聚苯乙烯/二乙烯基苯基質，該方法后續修飾使用的試劑對環境的危害較??；但是，其合成的樹脂顆粒較大，不均勻，很難做到高分辨率分離，而且，該基質雖然較為親水，但應用在生物分子分離上，其親水性還無法滿足要求，限制了其在生物分離上的應用。

Hongdeng?Qiu等（Journal?of?Chromatography?A,?2006,?1103,265–270）使用硅膠為基質鍵合上了含強陰基團的硅烷偶聯劑，合成的強陰型離子交換層析介質用于小分子的分離純化。該介質具備很好的機械強度，對混合物的分離效果較好，但是硅膠基質的離子交換層析介質不耐堿性，在很大程度上限制了它的應用范圍。

美國專利20050020536公開了一種以瓊脂糖為基質的Q?Sepharose?Fast?Flow(GE?Healthcare)分離純化磺達肝癸鈉的方法，該方法以氯化鈉水溶液為流動相，得到99%的純度。但是該方法使用的介質為瓊脂糖骨架，其在不同流速下柱體積會發生變化，而且相對聚丙烯酸酯基質，其在較高壓力條件下會發生變形，這限制了其在高流速分離中的應用。

發明內容

本發明的目的是針對上述問題，提供一種能達到高純度和高回收率，而且柱層析不會隨著鹽濃度和流速的變化而發生變化，層析填料可耐高壓和高流速的層析介質。

為實現上述目的，本發明提供的技術方案是，單分散聚甲基丙烯酸酯離子交換層析介質在磺達肝癸鈉柱層析純化中的應用，采用單分散聚甲基丙烯酸酯離子交換層析介質為填料的色譜柱進行柱層析。?

優選的，用所述單分散聚甲基丙烯酸酯離子交換層析介質作為色譜柱的固定相，將含磺達肝癸鈉的樣品上樣于該色譜柱上，用鹽的水溶液作為流動相洗脫吸附在固定相上的磺達肝癸鈉。

優選的，所述鹽的水溶液是NaCl的水溶液。

優選的，所述單分散聚甲基丙烯酸酯離子交換層析介質是由蘇州納微生物科技有限公司生產，產品型號為Uni?Q-50S。

將單分散聚甲基丙烯酸酯離子交換層析介質Uni?Q-50S作為填料轉入色譜柱成為固定相，把含有待分離或分析含磺達肝癸鈉的溶液流過該色譜柱，然后用鹽的水溶液作為流動相流過色譜柱，洗脫吸附在固定相Uni?Q-50S上的待分離或分析的含磺達肝癸鈉溶液。

本發明的有益效果是：單分散聚甲基丙烯酸酯離子交換層析介質Uni?Q-50S不但利于以水溶液做流動相分離純化磺達肝癸鈉粗品，達到高純度和高回收率，而且柱層析不會隨著鹽濃度和流速的變化而發生變化，層析填料可耐高壓和高流速，同時可使用低鹽濃度將吸附在層析柱上的磺達肝癸鈉洗脫下來。

附圖說明

圖1是實施例1中使用的蘇州納微生物科技有限公司單分散聚甲基丙烯酸酯離子交換層析介質Uni?Q-50S掃描電鏡照片。