[發明專利]呋喃唑酮代謝物半抗原及其制備方法和應用在審

申請號：	201210100649.1	申請日：	2012-04-05
公開（公告）號：	CN103360335A	公開（公告）日：	2013-10-23
發明（設計）人：	萬宇平;馮才偉;羅曉琴;孫震;陶光燦;汪善良;馮靜;楊秀賢;朱亮亮;劉玉梅;崔廷婷;石潔	申請（專利權）人：	北京勤邦生物技術有限公司
主分類號：	C07D263/26	分類號：	C07D263/26;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K14/75;C07K14/47;C07K1/113;C07K16/44;G01N33/577
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搜索關鍵詞：	呋喃代謝物半抗原及其制備方法應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種半抗原及其制備方法和應用，具體涉及呋喃唑酮代謝物半抗原及其制備方法和應用。

背景技術

呋喃唑酮(Furazolidone)屬硝基呋喃類藥物，為廣譜抗生素，對革蘭氏陽性及陰性菌均有一定抗菌作用，被廣泛應用于家禽、家畜、水產品的痢疾、腸炎、球蟲病以及火雞黑頭病的預防和治療。但研究證明硝基呋喃類藥物及其代謝物具有相當大的毒性，有致畸胎副作用，且能誘發癌癥。我國農業部文件農牧發[2002]1號規定食品性動物中呋喃唑酮的檢出限為不得檢出。

由于硝基呋喃類藥物在體內很快就能被代謝，而在組織中結合的代謝產物則能存留較長的一段時間，所以在分析此類藥物的殘留時經常要分析其代謝后的產物，管理部門就以檢測代謝產物為手段達到檢測硝基呋喃類殘留的目的。目前用來檢測呋喃唑酮代謝物的最常用方法是高效液相色譜法(HPLC)、液質聯用法(LC-MS、LC-MS/MS)等，由于復雜的儀器設備和繁瑣的前處理過程以及對檢驗人員的高技能要求，不適合現場監控和大量樣本的篩查。而以抗原抗體特異性反應為基礎的免疫分析技術具有靈敏度高、特異性強、操作簡便等優點，已在食品安全檢測領域得到廣泛應用，這為呋喃唑酮代謝物的檢測提供了新的途徑。

發明內容

本發明的目的是提供一種呋喃唑酮代謝物半抗原及其制備方法。

本發明提供的呋喃唑酮代謝物半抗原，分子結構式為：

本發明提供的呋喃唑酮代謝物半抗原的制備方法，包括如下步驟：

取呋喃唑酮代謝物(AOZ)1.02g和20ml?N，N-二甲基甲酰胺(DMF)混合，得到A液；取對苯二甲醛2.68～5.36g和50～100ml?DMF混合，得到B液；室溫下將A液緩慢滴加入B液中，滴加完畢后室溫至60℃反應2～4h，除去溶劑，柱層析純化，得到淡黃色物質，即為呋喃唑酮代謝物半抗原。

本發明的另一個目的是上述呋喃唑酮代謝物半抗原在免疫檢測中的應用，具體包括由所述呋喃唑酮代謝物半抗原與載體蛋白偶聯得到的呋喃唑酮代謝物抗原，及由所得呋喃唑酮代謝物抗原免疫動物制備得到的呋喃唑酮代謝物抗體，

其中所述載體蛋白可為鼠血清蛋白、甲狀腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血藍蛋白或纖維蛋白原，

所述抗體為呋喃唑酮代謝物單克隆抗體。

本發明還提供由上述呋喃唑酮代謝物抗體制備的酶聯免疫試劑盒及其在檢測動物源性食品中呋喃唑酮代謝物殘留的應用。

本發明提供的呋喃唑酮代謝物半抗原既最大程度地保留了呋喃唑酮代謝物的化學結構，又通過化學合成改造引入了可以與蛋白質偶聯的-CHO，合成方法簡單，純度、產率較高；用該半抗原作為原料，制備適于動物免疫的抗原體系免疫動物，所得抗體的效價、特異性、親和力都比較好；所得的抗體用于酶聯免疫試劑盒，使用方便、檢測成本低、檢測方法高效、準確、快速、可同時檢測大批量的樣本，適于動物源性食品中呋喃唑酮代謝物殘留的現場監控和大量樣本的篩查。本發明的呋喃唑酮代謝物半抗原在呋喃唑酮代謝物的檢測中發揮重要作用。

附圖說明

圖1：呋喃唑酮代謝物半抗原合成路線圖

圖2：呋喃唑酮代謝物半抗原核磁共振氫譜圖

圖3：呋喃唑酮代謝物酶聯免疫試劑盒標準曲線

具體實施方式

下面結合具體的實施例來進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明，而不用來限制本發明的范圍。

實施例1呋喃唑酮代謝物半抗原的合成和鑒定

一、呋喃唑酮代謝物半抗原的合成(合成路線見圖1)

二、呋喃唑酮代謝物半抗原的鑒定

取合成的呋喃唑酮代謝物半抗原經核磁共振氫譜測定，如圖2所示，圖譜中8.0ppm處的峰為引入苯環上4個H的信號峰，8.3ppm處的峰為醛基上H的信號峰，9.8ppm左右的峰為烯胺雙鍵上C-H的信號峰，說明半抗原合成成功。

實施例2呋喃唑酮代謝物抗原

將呋喃唑酮代謝物半抗原與載體蛋白進行偶聯得到呋喃唑酮代謝物抗原。