[發明專利]一種檢測呋喃西林代謝物的試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201210100268.3
• 申請日: 2012-04-07
• 公開（公告）號: CN103364555A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 何方洋;羅曉琴;陶光燦;吳鵬;陳煒玲;張荃;馮才茂;楊秀賢;劉玉梅
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種檢測呋喃西林代謝物的試劑盒及方法，具體涉及一種用于檢測樣品中呋喃西林代謝物的膠體金試紙條，其特別適于動物組織中呋喃西林代謝物殘留的檢測。

背景技術

硝基呋喃類藥物常作為廣譜類抗生素用于預防和治療由沙門氏菌和埃希氏菌引起的豬、牛、家禽及蜜蜂的胃腸道疾病。但在長時間的實驗研究過程中發現，硝基呋喃類藥物和代謝物均可以使實驗動物發生癌變和基因突變，此類藥物禁止在治療和飼料中使用。

由于硝基呋喃類原型藥在生物體內代謝迅速，無法檢測，但其代謝產物因和蛋白質結合而相當穩定，所以在分析此類藥物的殘留時經常要分析其代謝后的產物，管理部門就以檢測代謝產物為手段達到檢測硝基呋喃類殘留的目的。目前用來檢測硝基呋喃類代謝物的最常用方法是高效液相色譜法(HPLC)、液質聯用法(LC-MS/MS)等，這些方法靈敏度高、結果準確、重復性好、假陽性少，但樣品前處理過程復雜，儀器化程度高價格昂貴，與之相比，免疫方法具有靈敏度高、樣品預處理簡單、短暫的檢測時間、較大的檢測樣本量等特點，適合現場監控和大量樣品的篩查。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測呋喃西林代謝物的試劑盒。

本發明所提供的試劑盒包括試紙和微孔試劑，微孔試劑具有微孔塞，試紙包括反應膜、樣品吸收墊、吸水墊、保護膜、底板；所述微孔試劑中凍干有呋喃西林代謝物特異性抗體-膠體金標記物；呋喃西林代謝物特異性抗體可為呋喃西林代謝物單克隆抗體或呋喃西林代謝物多克隆抗體；反應膜上包括檢測區和質控區；當呋喃西林代謝物特異性抗體為呋喃西林代謝物單克隆抗體時，檢測區包被呋喃西林代謝物半抗原-載體蛋白偶聯物，質控區包被羊抗鼠抗抗體；當呋喃西林代謝物特異性抗體為呋喃西林代謝物多克隆抗體時，檢測區包被呋喃西林代謝物半抗原-載體蛋白偶聯物，質控區包被羊抗兔抗抗體。

所述呋喃西林代謝物半抗原-載體蛋白偶聯物是由呋喃西林代謝物半抗原與載體蛋白偶聯得到，所述載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血藍蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。

所述呋喃西林代謝物特異性抗體-膠體金標記物中的呋喃西林代謝物特異性抗體是以呋喃西林代謝物半抗原-載體蛋白作為免疫原制備獲得。

所述保護膜粘貼在樣品吸收墊上，為檢測端，上面有MAX標記線。

所述檢測區位于近于有MAX標記的保護膜的一端，所述質控區位于遠離有MAX標記的保護膜的一端。

所述底板可為PVC底板或其他硬質不吸水的材料；所述樣品吸收墊可為吸濾紙或濾油紙；所述吸水墊為吸水紙；所述反應膜可為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜；所述保護膜為PE材質保護膜。

本發明的另一個目的是提供一種制備上述試劑盒的方法，其包括步驟：

1)制備凍干有呋喃西林代謝物特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑；

2)制備具有包被呋喃西林代謝物半抗原-載體蛋白偶聯物的檢測區和包被抗抗體的質控區的反應膜；

3)將2)制備好的反應膜與樣品吸收墊、吸水墊、保護膜、底板組裝成試紙；

4)將1)和3)制備好的凍干有呋喃西林代謝物特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑和試紙組裝成試劑盒。

具體地說，步驟包括：

1)制備呋喃西林代謝物半抗原；將呋喃西林代謝物半抗原與載體蛋白偶聯，制備呋喃西林代謝物半抗原-載體蛋白偶聯物；

2)用呋喃西林代謝物半抗原-載體蛋白偶聯物免疫小鼠，將小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞通過融合、篩選，得到分泌呋喃西林代謝物單克隆抗體的雜交瘤細胞株或用呋喃西林代謝物半抗原-載體蛋白偶聯物免疫兔，得到呋喃西林代謝物多克隆抗體；

3)提取小鼠IgG或兔IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠IgG抗體或羊抗兔抗抗體；

4)用檸檬酸三鈉與氯金酸反應制備膠體金；

5)將制備的呋喃西林代謝物特異性抗體加入到制備的膠體金中，得到呋喃西林代謝物特異性抗體-膠體金標記物；

6)將呋喃西林代謝物特異性抗體-膠體金標記物凍干在微孔試劑中后，將微孔試劑加上微孔塞；

7)將樣品吸收墊用含牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在緩沖液中的終濃度為0.5％～1％體積百分含量)、pH為7.2、0.1mol/L磷酸鹽緩沖液浸泡2h，37℃下烘干2h；

8)在底板上按順序粘貼上樣品吸收墊、反應膜、吸水墊和保護膜；

9)將制備好的微孔試劑和試紙組裝成試劑盒，2～8℃條件下保存12個月。

本發明的另一個目的是提供一種應用上述試劑盒檢測動物組織中呋喃西林代謝物殘留的方法，它包括步驟：