[發明專利]篩選乳腺炎抗性奶牛的HSTN基因SNP位點、方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201210099763.7
• 申請日: 2012-04-06
• 公開（公告）號: CN102604944A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 鞠志花;黃金明;王長法;李秋玲;齊超;張燕;李建斌;侯明海;仲躋峰
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院奶牛研究中心
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術領域

本發明屬于家畜分子生物學技術領域，涉及篩選乳腺炎抗性奶牛的HSTN基因SNP位點、應用方法及試劑盒。

背景技術

奶牛乳腺炎(Mastitis)是指奶牛乳腺受到物理、化學刺激，尤其是微生物的侵襲而發生的一種炎性變化，它不僅影響乳汁品質，而且降低產奶量，給奶業發展造成了嚴重的危害。據報道，乳腺炎在我國牛群中的陽性率可高達40％-80％，奶牛乳腺炎已成為目前困擾我國奶牛養殖業的頭號難題，因此控制其發病率，降低治療乳腺炎的費用，對于提高奶牛生產者的經濟效益非常重要。

奶牛乳腺炎分為臨床型乳腺炎(Clinical?mastitis)和隱性乳腺炎(Hidden?mastitis)(也稱亞臨床型乳腺炎，Subclinical?mastitis)兩種類型。臨床型乳腺炎可產生明顯的臨床癥狀，比較容易作出診斷，而對于隱性乳腺炎要作出準確的診斷，須借助一些實驗室的診斷方法。體細胞數(SCS)和乳腺炎之間的遺傳相關從0.30到0.98，平均值為0.70，SCS與乳腺炎之間的高遺傳相關使得SCS成為乳腺炎一個可行的遺傳標記。如加拿大將SCS包括在總經濟價值指數(TEV)中，而瑞典利用SCS制定了乳腺炎抗性指數。通過直接顯微鏡細胞記數法測定乳中SCS來評價奶牛各乳區和奶牛健康狀況是目前比較公認的作法。人們通過功能基因多態性與SCS進行關聯分析就可得到顯著影響奶牛乳腺炎抗性的分子標記。

Histatherin(HSTN)由牛富組蛋白(Histatin，HTN)基因和富酪蛋白(Statherin，STATH)基因重組形成的HSTN基因編碼，是富組蛋白和富酪蛋白的組合體，是最近發現的一種抗菌肽。Molenaar等(2008)人工合成了HSTN并進行了體外抗菌實驗，發現在磷酸鹽緩沖液中，3.1μg/mL濃度的HSTN能殺死大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，6.25μg/mL濃度時能殺死念珠菌，表明HSTN的抗菌殺菌活性非常顯著。據此推測HSTN在牛體內與免疫應答有關，具體的作用及其調控機制尚不清楚。HSTN基因是影響牛乳腺炎性狀的一個重要基因，其單核苷酸多態性(SNP)是導致不同牛個體間抗乳腺炎性狀差異的遺傳學基礎，但利用其SNP及單倍型組合與奶牛抗乳腺炎的關系檢測奶牛抗性性狀的試劑盒未見報道。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的提出一種用于HSTN基因單倍型組合篩選乳腺炎抗性奶牛的方法，并通過此單倍型組合與乳腺炎抗性性狀的關系，進而提供一種新的篩選乳腺炎抗性奶牛的試劑盒，為奶牛的標記輔助選擇提供新的分子標記，可進行奶牛的早期篩選。

為實現這一目的，本發明提出的一個新的奶牛HSTN基因的單倍型組合H2H2(AATTGG)，是檢測奶牛自GenBank?Accession?No?NC_007304.5(88288094-88302412)中第635位脫氧核糖核苷酸是A還是T，第1607位脫氧核糖核苷酸是T還是C，第12624位脫氧核糖核苷酸是T還是G，確定所述奶牛在這三個位點的單倍型組合，然后通過單倍型組合確定乳腺炎抗性性狀。

為實現上述發明目的，本發明采用如下技術方案：

一種篩選乳腺炎抗性奶牛的SNP位點，所述SNP位點為奶牛HSTN基因第635位、第1607位和第12624位堿基，奶牛HSTN基因第635位為A/T、第1607位為T/C和第12624位為T/G。

所述篩選乳腺炎抗性奶牛的SNP位點可以應用于制備篩選乳腺炎抗性奶牛試劑盒。

一種篩選乳腺炎抗性奶牛的方法，為：提取奶牛基因組DNA，測定奶牛HSTN基因第635位、1607位和12624位堿基多態性，根據奶牛第635位、1607位和12624位的單倍型組合預測奶牛的乳腺炎抗性：當奶牛HSTN基因第635位、1607位和12624位基因單倍型組合為H2H2(ATG/ATG)基因型時，奶牛乳腺炎抗性最強；當奶牛HSTN基因第635位、1607位和12624位基因單倍型組合為H3H7(TTCCTG)時，奶牛的乳腺炎抗性最差。