[發明專利]來源于血清的水溶性膽固醇凍干品的制備方法

有效

• 申請號: 201210099638.6
• 申請日: 2012-04-06
• 公開（公告）號: CN102645358A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 李子樵;王青
• 申請（專利權）人: 上海藍怡科技有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 何新平

[技術領域]

本發明涉及一種膽固醇的凍干品，具體的說是一種應用在生物、醫學檢驗研究的來源于血清的水溶性膽固醇凍干品的制備方法。

[背景技術]

膽固醇，別名膽甾醇，化學式為C₂₇H₄₆O，是一種類固醇及甾醇。膽固醇是水溶性很差的有機化合物，純品膽固醇在水中的溶解度大約只有0.095mg/L(30℃)，因此在這樣低的溶解性下，用作溶液配制或校準品/質控品制備將會很難添加。由于血清中有含有一定濃度的水溶性膽固醇，這些水溶性膽固醇或與某些化合物結合，或與脂蛋白結合，從而具有較強的水溶性，鑒于此，目前有些企業采取高濃度血清當作配制用，還有一些通過濃縮血清得到高濃度的膽固醇濃縮液，但是這些做法的缺陷是：一則難以獲得純度較高的產品，其血清基質含量很高，從而影響了產品的品質；再次，由于是液體產品，其穩定性較差。

對于干燥熱敏性制品和需要保持生物活性的物質，凍干是一種有效的方法。該方法有效地防止了制品理化及生物特性的改變，能有效保護了許多熱敏性藥物生物制品有效成份的穩定性。到目前為止有很多藥品、生物制品等采用凍干方法進行制備。

[發明內容]

本發明為了克服現有技術的不足，提供了一種來源于血清的水溶性膽固醇凍干品的制備方法。

為了實現上述目的，本發明設計了一種來源于血清的水溶性膽固醇凍干品的制備方法，采用如下步驟：

A、用1mol/L的氫氧化鈉將其pH值調至6.9，取150ml無水乙醇逐滴加入不斷攪拌的血清中，室溫攪拌2h后，1000g離心10min，收集沉淀物；

B、稱取0.3g葡聚糖和6.5g氯化鈣，溶于500ml去離子水中，用這一溶液溶解步驟A中收集到的沉淀，室溫攪拌2h后，1000g離心10min，再次收集沉淀物；

C、將步驟B中收集到的沉淀物重新溶解，之后凍干，即得富含膽固醇的凍干品。

所述步驟A中，血清的含量為1L，pH為5-9。

所述步驟B中，氯化鈣的濃度為25mmol/L。

所述步驟B中，葡聚糖的濃度為2.6mmol/L。

本發明同現有技術相比，膽固醇凍干后用去離子水復溶，外觀呈澄明，膽固醇純度高，該凍干品能長期穩定貯存，方法操作簡便、重復性好，回收率高。而且其來源于血清，因此可以廣泛應用于生物、醫學檢驗等領域。

[具體實施方式]

本發明提供了一種血清來源的富含水溶性膽固醇的凍干品。本發明提供的凍干品穩定性好，復溶后液體澄明，不含異物或不溶物，水溶性的膽固醇既不會對常規項目的檢測有明顯的干擾，也不會對其他組分的穩定性有影響。

下面通過實施例對本發明作進一步描述。

本發明為一種來源于血清的水溶性膽固醇凍干品的制備方法，采用如下步驟：(A)以1L血清為例，用1mol/L的氫氧化鈉將其pH值調至6.9，取150ml無水乙醇逐滴加入不斷攪拌的血清中，室溫攪拌2h后，1000g離心10min，收集沉淀物；

(B)稱取0.3g葡聚糖和6.5g氯化鈣，溶于500ml去離子水中，用這一溶液溶解步驟A中收集到的沉淀，室溫攪拌2h后，1000g離心10min，再次收集沉淀物；

(C)將步驟B中收集到的沉淀物重新溶解，之后凍干，即得富含膽固醇的凍干品。

實驗一、復溶后膽固醇的外觀檢驗

將按上述實施例制備的凍干品分別順序編號后，采用隨機數表決定抽取樣品的號碼，隨機抽取5支做檢驗。加入去離子水復溶，凍干品快速溶解，10-15min溶解完全，液體澄明，不含異物或不溶物。

實驗二、膽固醇濃度的測定

膽固醇酶法測定簡便，具有足夠的靈敏度，精密度良好，故選用酶法測定膽固醇濃度。選用膽固醇試劑盒，采用自動生化分析儀對5支復溶的膽固醇凍干品進行測定，具體參數參見下表。

通過上表可知，膽固醇凍干品的含量非常高。

實驗三、膽固醇凍干品穩定性監測

將膽固醇凍干品放置在2-8℃冰箱進行長期穩定性實驗，保存不同的時間后用膽固醇試劑盒檢測膽固醇的濃度，計算相對偏差，具體數據參見下表。

上述數據表明，凍干品穩定性良好。