[發(fā)明專利]具有多個(gè)除草劑抗性AHASL1等位基因的除草劑抗性向日葵植物及使用方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210099616.X | 申請(qǐng)日： | 2008-04-02 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN102808017A | 公開（公告）日： | 2012-12-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | C·薩拉;M·布洛斯;M·埃查爾特;B·K·辛格;B·J·韋斯頓;S·R·惠特 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 巴斯夫農(nóng)業(yè)化學(xué)品有限公司;奈德拉股份有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/68 | 分類號(hào)： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京市中咨律師事務(wù)所 11247 | 代理人： | 柴云峰;黃革生 |
| 地址： | 荷蘭*** | 國(guó)省代碼： | 荷蘭;NL |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 具有 除草劑 抗性 ahasl1 等位基因 向日葵 植物 使用方法 | ||
1.用于向日葵AHASL1基因分型的方法，所述方法包括步驟：
(a)從向日葵植物中獲得基因組DNA；
(b)利用所述DNA作為模板進(jìn)行第一次聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增，其包含所述DNA、聚合酶、脫氧核糖核苷三磷酸、正向AHASL1引物和反向野生型AHASL1引物，其中所述反向野生型AHASL1引物與包含SEQ?ID?NO：13所示核苷酸序列的核苷酸序列退火，其中位于所述反向野生型AHASL1引物3’端核苷酸的核苷酸是SEQ?ID?NO：13所示核苷酸序列的第1位核苷酸的互補(bǔ)核苷酸；
(c)利用所述DNA作為模板進(jìn)行第二PCR擴(kuò)增，其包含所述DNA、聚合酶、脫氧核糖核苷三磷酸、所述正向AHASL1引物和突變型反向AHASL1引物，其中所述反向突變型AHASL1引物與包含SEQ?ID?NO：14所示核苷酸序列的核苷酸序列退火，其中位于所述反向突變型AHASL1引物3’端核苷酸的核苷酸是SEQ?ID?NO：14所示核苷酸序列的第1位核苷酸的互補(bǔ)核苷酸；以及
(d)檢測(cè)所述第一和所述第二PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物；
其中所述正向AHASL1引物包含對(duì)應(yīng)于(ACC)n區(qū)域5’的向日葵AHASL1基因區(qū)域的核苷酸序列。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述反向野生型AHASL1引物包含SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述反向突變型AHASL1引物包含SEQ?ID?NO：5所示的核苷酸序列。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述正向AHASL1引物與包含SEQ?ID?NO：12所示核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列退火。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述正向AHASL引物包含SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列。
6.用于向日葵AHASL1基因分型的試劑盒，所述試劑盒包含
(a)正向AHASL1引物，該引物包含對(duì)應(yīng)于(ACC)n區(qū)域5’的向日葵AHASL1基因區(qū)域的核苷酸序列。
(b)反向野生型AHASL1引物，其中所述反向野生型AHASL1引物與包含SEQ?ID?NO：13所示核苷酸序列的核苷酸序列退火，其中位于所述反向野生型AHASL1引物的3’端核苷酸的核苷酸是SEQ?ID?NO：13所示核苷酸序列的第1位核苷酸的互補(bǔ)核苷酸，以及
(c)反向突變型AHASL1引物，其中所述反向突變型AHASL1引物與包含SEQ?ID?NO：14所示核苷酸序列的核苷酸序列退火，其中位于所述反向突變型AHASL1引物的3’端核苷酸的核苷酸是SEQ?ID?NO：14所示核苷酸序列的第1位核苷酸的互補(bǔ)核苷酸。
7.權(quán)利要求6的試劑盒，其進(jìn)一步包含能夠催化向日葵AHASL基因的第一片段和向日葵AHASL基因的第二片段的PCR擴(kuò)增的聚合酶，其中第一片段位于向日葵AHASL1基因中所述正向AHASL1引物的所述退火位點(diǎn)和所述反向野生型AHASL1引物的所述退火位點(diǎn)之間，第二片段位于向日葵AHASL1基因中所述正向AHASL1引物的所述退火位點(diǎn)和所述反向突變型AHASL1引物的所述退火位點(diǎn)之間。
8.權(quán)利要求6的試劑盒，其中所述正向AHASL1引物與包含SEQ?ID?NO：12所示核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列退火。
9.權(quán)利要求6的試劑盒，其中所述正向AHASL引物包含SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列。
10.權(quán)利要求6的試劑盒，其中所述反向野生型AHASL1引物包含SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列。
11.權(quán)利要求6的試劑盒，其中所述反向突變型AHASL1引物包含SEQ?ID?NO：5所示的核苷酸序列。
12.分離的多核苷酸，其包含SEQ?ID?NO：3、SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO：5、SEQ?ID?NO：16或SEQ?ID?NO：17中所示的核苷酸序列。
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