[發明專利]微乳液試劑盒的制備方法

有效

• 申請號: 201210099587.7
• 申請日: 2012-04-06
• 公開（公告）號: CN102621138A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 李子樵;張祥洪
• 申請（專利權）人: 上海藍怡科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 何新平

[技術領域]

本發明涉及一種試劑，具體涉及一種穩定微乳液試劑盒制備的方法，可用于底物比色法測定血清脂肪酶試劑的配置。?

[背景技術]

血清脂肪酶作為一項胰腺功能檢測的指標，其特異性很好，1，2-二月桂-rac-甘油基-3-戊二酸-6-甲基試鹵靈酯底物比色法已在臨床診斷中得到了認可，然而市場上采用的底物比色法的試劑開封穩定性差，開封的時間越長，結果越偏低，開封不到半個月質控就下降到范圍之外，冷藏穩定性比較差，冷藏幾個月后會有底物沉淀，另外批間差也比較大，因此在使用上給檢驗人員帶來許多不便，結果的可信度也有所下降。?

[發明內容]

本發明為了克服現有技術的不足，提供了一種微乳液試劑盒的制備方法。?

為了實現上述目的，本發明設計了一種微乳液試劑盒的制備方法，包括試劑R1的制備，以及試劑R2的制備，具體步驟如下，其中：

試劑R1的制備：?

取TAPS緩沖液100mM/L；Colipase0.8mg/L；脫氧膽酸鈉1.6mM/L；氯化鈉0.5g/L；氯化鈣4mM/L；牛黃脫氧膽酸1.5mM/L；疊氮鈉0.1g/L；試劑R1的PH值為8.0；?

試劑R2的制備：?

A)取酒石酸緩沖液6mM/L；膽酸鈉4mM/L；牛黃脫氧膽酸7mM/L；防腐劑0.1g/L；氯化鈉0.5g/L；穩定劑，占試劑R2的0.1％-3％；試劑R2的PH值為3.5；?

B)取有機溶劑a，600μl，加入溴化十二烷基三甲基銨0.0086g，再加表?面活性劑b，0.0086g，將10mg底物加入溶解在此溶劑中；?

C)待步驟B中的溶液完全溶解后緩慢的加入到50ml步驟A中的溶液中，調節PH至3.5，并在一定溫度下下攪拌26分鐘，攪拌后用超聲儀20千赫茲的功率超聲8分鐘，可得澄清透明的橘黃色試劑。?

所述試劑R2的制備中，有機溶劑a為乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇或異丁醇中的一種。?

所述試劑R2的制備中，表面活性劑b為吐溫系列、曲拉通系列、Brij系列、司盤系列、3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸或AEO系列中的一種。?

所述試劑R2的制備中，穩定劑為山梨糖醇、絲氨酸或牛血清白蛋白中的一種。?

所述試劑R2的制備中，攪拌溫度最佳選擇是在35-45℃之間。?

所述試劑R2的制備中，底物為1，2-二月桂-rac-甘油基-3-戊二酸-6-甲基試鹵靈酯。?

所述試劑R2的制備中，酒石酸緩沖液的PH值為3.0-4.0。?

本發明同現有技術相比，改良的乳化方法后，在不影響試劑其他性能的基礎上，改善了試劑的穩定性和批間差大的問題。?

[附圖說明]

圖1為本發明試劑盒線性的趨勢圖。?

圖2為本發明試劑盒與免疫濁度法比較的相關性趨勢圖。?

圖3為本發明試劑盒與底物比色法比較的相關性趨勢圖。?

[具體實施方式]

下面結合附圖對本發明作進一步描述。?

實施例1：?

本發明的試劑盒，包括試劑R1的制備，以及試劑R2的制備，具體步驟如下，其中：?

試劑R1的制備：?

取TAPS緩沖液100mM/L；Colipase0.8mg/L；脫氧膽酸鈉1.6mM/L；氯化鈉0.5g/L；氯化鈣4mM/L；牛黃脫氧膽酸1.5mM/L；疊氮鈉0.1g/L；試劑R1的PH值為8.0。?

試劑R2的制備：?

A)取酒石酸緩沖液6mM/L；膽酸鈉4mM/L；牛黃脫氧膽酸7mM/L；防腐劑0.1g/L；氯化鈉0.5g/L；牛血清白蛋白，占試劑R2的0.1％-3％；試劑R2的PH值為3.5。?

B)取有機溶劑a正丁醇600μl，加入溴化十二烷基三甲基銨0.0086g，再加表面活性劑b，3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸0.0086g，將10mg底物1，2-二月桂-rac-甘油基-3-戊二酸-6-甲基試鹵靈酯加入溶解在此溶劑中。?

C)待步驟B中的溶液完全溶解后緩慢的加入到50ml步驟A中的溶液中，調節PH至3.5，并在40℃下攪拌26分鐘，攪拌后用超聲儀20千赫茲的功率超聲8分鐘，可得澄清透明的橘黃色試劑。?

實施例2：?

將實施例1中的有機溶劑a換成異丁醇，其他配置步驟和實施例1相同。?

實施例3：?