[發(fā)明專利]基于膠乳粒子包被視黃醇結(jié)合蛋白檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210099532.6
• 申請日: 2012-04-06
• 公開（公告）號: CN102621332A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李子樵;房君江
• 申請（專利權(quán)）人: 上海藍(lán)怡科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 何新平

[技術(shù)領(lǐng)域]

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)免疫體外診斷領(lǐng)域，特別是一種基于膠乳粒子包被視黃醇結(jié)合蛋白檢測試劑盒。

[背景技術(shù)]

視黃醇結(jié)合蛋白屬于Lipocalin超家族，相對分子質(zhì)量約21×10³，配體主要是全反式視黃醇，即維生素A，Kd＝20Nm，結(jié)合位點(diǎn)1。RBP主要負(fù)責(zé)結(jié)合、轉(zhuǎn)運(yùn)血漿中的維生素A。外源性的維生素A進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)后，首先與RBP結(jié)合，視黃醇-RBP復(fù)合體進(jìn)一步與甲狀腺素運(yùn)載蛋白(transthyretin，TTR)形成三元復(fù)合物而被轉(zhuǎn)運(yùn)。

肝臟是維生素A儲存及RBP合成與分泌的主要場所。RBP的分泌嚴(yán)格受機(jī)體視黃醇含量的影響。有關(guān)RBP突變體和基因敲除小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，血液中RBP的缺失，除了引起視覺功能障礙外，對機(jī)體其他方面功能沒有明顯影響，因此，RBP可能只是在膳食維生素A缺乏時(shí)為機(jī)體視黃醇的代謝穩(wěn)定提供一種保障。

與疾病的關(guān)系：RBP是一種可自由通過腎小球、重吸收率很高的小分子量蛋白，在健康人尿中含量很低。糖尿病腎病患者早期就出現(xiàn)腎小管損害，尿RBP是診斷早期糖尿病腎病的一個(gè)較敏感的指標(biāo)；慢性腎功能衰竭(CRF)患者血中RBP大量積聚。

RBP由肝細(xì)胞合成，當(dāng)肝細(xì)胞損傷時(shí)，RBP合成受抑制，故檢測血液RBP水平，可敏感地反映肝功能的改變。放免法檢測發(fā)現(xiàn)，肝硬化和急、慢性肝炎的血清RBP水平均明顯低于正常對照組，急性病毒性肝炎早期血清RBP含量下降比晚期更明顯RBP與機(jī)體的營養(yǎng)狀態(tài)：RBP不僅參與視黃醇的運(yùn)轉(zhuǎn)，其分泌也嚴(yán)格受機(jī)體維生素A含量的影響，大量口服視黃醇可導(dǎo)致血液及肝臟RBP下降。維生素A的缺乏可改變血液中RBP含量并抑制肝臟分泌RBP，機(jī)體營養(yǎng)不良或應(yīng)激反應(yīng)時(shí)RBP可迅速下降。由于RBP的半衰期相對較短，變化早于前白蛋白(PA)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)等且靈敏性更高，故可作為判斷營養(yǎng)狀態(tài)應(yīng)激反應(yīng)的指標(biāo)診斷方法

膠乳顆粒增強(qiáng)比濁法(particle-enhanced?turbidimetric?immunoassay，PETIA)是近年來出現(xiàn)的一種較為穩(wěn)定、準(zhǔn)確的體液蛋白均相免疫比濁檢測方法。PETIA法大體分為兩種。一種是散射比濁檢測法；另一種是透射比濁檢測法。這兩種方法的基本原理非常相似，都是在高分子膠乳微球的表面交聯(lián)單克隆抗體，當(dāng)交聯(lián)有抗體的微球與抗原結(jié)合后，在短時(shí)間內(nèi)會迅速聚集在一起，改變了反應(yīng)液的散光性能或透光性能。而且，反應(yīng)液散光性能或透光性能(即吸光度)的改變與被測抗原的濃度有較強(qiáng)的相關(guān)性，在一定范圍內(nèi)可以反映被測抗原的濃度。PETIA檢測方法是在均相反應(yīng)體系中進(jìn)行抗原、抗體反應(yīng)及結(jié)果的測定。抗原、抗體反應(yīng)后，直接測定反應(yīng)液的吸光度值，省卻了ELISA法反復(fù)孵育和洗板等煩瑣操作步驟，幾分鐘就能獲得結(jié)果，省時(shí)省力。此外，納米免疫比濁法操作步驟的簡化也相應(yīng)地避免了許多人為操作因素和試劑、環(huán)境等外界因素的干擾，穩(wěn)定性和重復(fù)性都較好，能較真實(shí)地反映被測物質(zhì)的含量。免疫比濁法的靈敏度雖然比ELISA法差一些，但足于檢測到健康人血漿中許多標(biāo)志蛋白的下限值，可完全滿足臨床檢測要求。

視黃醇結(jié)合蛋白檢測方法，由最初免疫電泳的定性檢測，到放射免疫、熒光免疫和酶免疫的定量檢測，以及到免疫比濁的自動化檢測，發(fā)展十分迅速。目前，國內(nèi)外免疫比濁法是最為普遍通用的方法。但是免疫比濁法原理基于抗體抗原免疫反應(yīng)結(jié)合形成濁度，來檢測血清中RBP的濃度。并沒有采用檢測信號方法技術(shù)，其最低檢測限只能達(dá)到10mg/l。同時(shí)存在著開瓶穩(wěn)定性不好、較易受溶血干擾等問題。在臨床上只能用于腎功能的輔助診斷。

[發(fā)明內(nèi)容]

本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種高靈敏度、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高、抗干擾能力強(qiáng)的視黃醇結(jié)合蛋白檢測試劑盒。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明設(shè)計(jì)了一種基于膠乳粒子包被視黃醇結(jié)合蛋白檢測試劑盒，包括試劑R1，試劑R2以及校準(zhǔn)品，其中：

試劑R1為Tris-HCl緩沖體系，包括Tris-HCl緩沖液30-60mmol/l，PH值為7.2-7.6；聚合物60-95mmol/l；乙二胺四乙酸二鈉6-13mmol/l；

試劑R2，包括羊抗人視黃醇結(jié)合蛋白多克隆抗體包被聚苯乙烯乳膠粒子致敏顆粒；磷酸鹽緩沖液35-60mmol/l，PH值為7.2-7.6；

參考校準(zhǔn)品，包括牛血清基質(zhì)；根據(jù)牛血清基質(zhì)的體積用量百分比，還包括防腐劑0.2-2.2％；穩(wěn)定劑1-10％。

所述試劑R2中，聚苯乙烯乳膠粒子的直徑為45-92nm。