[發明專利]基于阿片肽Biphalin和神經肽FF的嵌合肽及其合成和應用

有效

• 申請號: 201210098832.2
• 申請日: 2012-04-06
• 公開（公告）號: CN102850431A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 王銳;方泉;韓政嵐;王子龍;李寧
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/20;C07K1/16;C07K1/06;C07K1/04;A61K38/08;A61P25/04
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心 62100
• 代理人: 張英荷

1.一種基于阿片肽Biphalin和NPFF的嵌合肽，其結構式如下：

。

2.如權利要求1所述基于阿片肽Biphalin和NPFF的嵌合肽的合成方法，包括以下工藝步驟：

（1）樹脂預處理：將Rink-Amide-MBHA樹脂在二氯甲烷中攪拌30-40?min，使樹脂充分溶脹后減壓抽干溶劑；

（2）脫除Fmoc保護：將溶脹、抽干溶劑后的樹脂在體積濃度18-25％的六氫吡啶/DMF溶液中，攪拌3-10min后抽干，重復2-3次；再加入體積濃度18-25％的六氫吡啶/DMF溶液，攪拌10-15min，使Fmoc基團脫除完全，然后抽干溶劑；最后用DMF洗滌除凈六氫吡啶，得到脫除Fmoc基團保護的樹脂；

（3）縮合：依次將N-α-Fmoc保護基團氨基酸、N-羥基苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲-六氟磷酸鹽完全溶解于DMF中，再加入二異丙基乙胺后混勻得混合溶液；然后在氬氣保護下，將脫除Fmoc基團保護的樹脂加入所述混合溶液中攪拌反應40-60min，抽干溶劑；用DMF重復洗滌除去未反應的N-α-Fmoc保護基團氨基酸、N-羥基苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲-六氟磷酸鹽；

所述?N-α-Fmoc保護基團氨基酸、N-羥基苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲-六氟磷酸鹽的用量分別為脫除Fmoc基團保護的樹脂摩爾量的2-5倍；

所述二異丙基乙胺的用量為脫除Fmoc基團保護的樹脂摩爾量的4-10倍；

（4）肽鏈的延長：重復步驟（2）、（3）8次，按照嵌合肽結構由C-末端向N-末端的順序，依次將帶有N-α-Fmoc保護基團氨基酸逐個縮合至樹脂上，直至完成所有氨基酸殘基的縮合，得到肽樹脂；

（5）肽鏈從樹脂上的切割：按照步驟（2）的方法將肽樹脂最后一個氨基酸的?Fmoc基團完全脫除；用DCM、MeOH交替洗滌樹脂，充分抽干溶劑后，按每克肽樹脂加入10-25ml的切割劑，于室溫下切割反應1.5-5小時；過濾，濾液在不高于37℃的條件下充分減壓旋干，然后用不高于-10℃的乙醚中析出沉淀；靜置后先去除上清的乙醚，再用水充分溶解后用分液漏斗除去乙醚相，水相經冷凍干燥，得白色粗肽固體粉末；

（6）粗肽的脫鹽和純化：以體積濃度10-20%的乙酸溶液為流動相，將粗肽通過Sephadex?G25交聯葡聚糖凝膠柱脫鹽，利用紫外檢測儀收集主峰后冷凍干燥，得到脫鹽的肽化合物；再利用反向高效液相色譜柱進行分離純化，收集主峰，冷凍干燥后得到白色的純肽固體粉末。

3.如權利要求1所述基于阿片肽Biphalin和NPFF的嵌合肽的合成方法，其特征在于：步驟（5）所述切割劑是由三氟乙酸、三異丙基硅烷、水以95:2.5:2.5的體積比混合形成的溶劑。

4.如權利要求1所述基于阿片肽Biphalin和NPFF的嵌合肽在制備鎮痛藥物中的應用。