[發明專利]腎上腺素alpha1受體亞型的熒光探針組合及其應用

有效

• 申請號: 201210098205.9
• 申請日: 2012-04-06
• 公開（公告）號: CN102719428A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 陳鵬慧;阮懷珍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

技術領域

本發明屬于核酸檢測技術領域，涉及一種核酸探針組合及其應用。

背景技術

神經膠質細胞約占中樞神經系統細胞總數的90%，其在神經系統中的重要性日益受到重視，逐漸成為神經科學研究的熱點之一。早先有神經生物學研究者在中樞神經系統中發現了一種具有典型雙極突起、胞體小而不規則的細胞，其形態很難歸入已知的神經膠質細胞范疇，而類似不成熟的膠質細胞。根據其能夠增殖并可分化為少突膠質細胞的特性，研究者將這種細胞命名為少突膠質前體細胞（oligodendrocyte?precursor?cell，OPC）。硫酸軟骨素蛋白多糖（NG2）是OPC的特異性免疫標記物和鑒定標準。早先的研究認為OPC是哺乳動物胚胎發育早期的少突膠質前體細胞，其在出生后分化成熟，成為成髓鞘的少突膠質細胞。但最近研究顯示，成熟的腦內也表達大量的NG2免疫陽性反應細胞，這些細胞在形態上與星狀膠質細胞、少突膠質細胞、小膠質細胞等均有所區別，胞體稍大，突起短而且豐富，有較多分枝，從形態學特征來看傾向認為是腦內一類成熟的膠質細胞，而這些細胞在灰質、白質及海馬區域的廣泛分布也預示其可能不嚴格屬于少突膠質細胞系的前體細胞，而是在中樞神經系統中與少突膠質細胞、星狀膠質細胞不同的一種新的膠質細胞類型。由于近年研究顯示OPC與神經退行性疾病、毒性物質作用、營養代謝障礙和缺氧缺血所致的白質損害等均密切相關，從而成為新近神經科學研究的熱點。哺乳動物腦內白質與灰質OPC形態有不同。OPC是否與星狀膠質細胞類似，在不同腦區也具有異質性，對于闡明其在體功能具有重要意義。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于針對OPC的異質性研究，設計和構建一種熒光探針。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

1、腎上腺素alpha1受體（alpha1-AR）亞型的熒光探針組合，由腎上腺素alpha1A受體（alpha1A-AR）熒光探針和腎上腺素alpha1B受體（alpha1B-AR）熒光探針組成，所述alpha1A-AR熒光探針的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示，alpha1B-AR熒光探針的核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示；所述alpha1A-AR熒光探針和alpha1B-AR熒光探針分別用熒光光譜互不重疊的熒光分子進行標記。

優選的，所述alpha1A-AR熒光探針和alpha1B-AR熒光探針中的任意一種用熒光分子Cy5進行標記，另一種用熒光分子Alexa?Fluor488進行標記。

2、alpha1-AR亞型的熒光探針組合作為區分不同腦區OPC的試劑的應用。

本發明的有益效果在于：本發明設計并構建了一種alpha1-AR亞型的熒光探針組合，包括alpha1A-AR熒光探針和alpha1B-AR熒光探針，應用該熒光探針組合和熒光原位雜交技術，在熒光標記OPC轉基因小鼠腦內，發現不同腦區OPC表達alpha1-AR類型不一致，alpha1A-AR和alpha1B-AR可以作為區分不同腦區OPC的標志物，該熒光探針組合可以作為區分不同腦區OPC的試劑，用于OPC的異質性研究。由于現有技術中針對alpha1A-AR和alpha1B-AR的抗體尚不具有特異性區分alpha1A-AR和alpha1B-AR的能力，而熒光標記技術具有檢測簡單、靈敏度高（相對于常規標記技術）、特異性強（相對于受體檢測技術）等優點，本發明的熒光探針組合具有良好的應用前景。

附圖說明

圖1顯示了Alpha1AAR-1寡核苷酸的質譜檢測結果，單吸收峰在16382Da。

圖2顯示了Alpha1BAR-1寡核苷酸的質譜檢測結果，單吸收峰在14491Da。

圖3顯示了海馬CA1區OPC表達alpha1A-AR（箭頭所示）但不表達alpha1B-AR。

圖4顯示了海馬CA2區OPC表達alpha1A-AR（箭頭所示）但不表達alpha1B-AR。

圖5顯示了大腦皮層灰質OPC既不表達alpha1A-AR也不表達alpha1B-AR。

圖6顯示了大腦皮層白質OPC既表達alpha1A-AR（箭頭所示）也表達alpha1B-AR。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本發明進行詳細的描述。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，例如分子克隆實驗指南（第三版，J.薩姆布魯克等著）中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。

一、alpha1A-AR熒光探針和alpha1B-AR熒光探針的制備