[發(fā)明專(zhuān)利]一種肝纖維化診斷的快速定量試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210098176.6
• 申請(qǐng)日: 2012-04-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102636642A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李伯安;張建;毛遠(yuǎn)麗;侯俊;陳國(guó)鳳;林長(zhǎng)青
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第三0二醫(yī)院;北京熱景生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/577
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 北京一格知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11316
• 代理人: 滑春生

1.一種基于上轉(zhuǎn)換發(fā)光技術(shù)的免疫層析試紙條，包括粘性底襯（5），在粘性底襯（5）的一側(cè)設(shè)置分析膜（3），另一側(cè)設(shè)置吸水墊（4），分析膜（3）上有結(jié)合墊（2），結(jié)合墊（2）中有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑TIMP-1抗體的上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料（UCP）結(jié)合物（6）。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析試紙條，其特征在于分析膜（3）為硝酸纖維素膜。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析試紙條，其中通過(guò)所述加樣孔，將生物樣品添加到結(jié)合墊（2）之上的樣品墊（1）上；結(jié)果判讀窗口對(duì)應(yīng)于分析膜（3）上的檢測(cè)帶（7）和質(zhì)控帶（8）；終點(diǎn)指示窗口對(duì)應(yīng)于吸水墊（4）上的終點(diǎn)指示帶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析試紙條，該試紙條用于檢測(cè)血液樣本。

5.一種TIMP-1上轉(zhuǎn)發(fā)光定量檢測(cè)試劑盒，包括權(quán)利要求1－4任意一項(xiàng)所述免疫層析試紙條，樣本稀釋液和樣品管。

6.根據(jù)權(quán)利要求1－4任意一項(xiàng)所述免疫層析試紙條的制造方法，包括以下步驟：

（1）包被

將TIMP-1單抗稀釋到2mg/ml，作為T(mén)線包被液，將羊抗鼠IgG稀釋到2mg/ml，作為C線包被液；通過(guò)噴膜機(jī)，將T線包被液和C線包被液包被到硝酸纖維素膜上晾干，即獲得單克隆抗體包被膜條；

（2）制備UCP標(biāo)記單抗

a)??稱(chēng)取10?mg?UCP顆粒置于錐形瓶中，

b)??加入10?ml?pH=7.2?0.20M?PB，

c)??在UCP顆粒懸濁液中加入0.?5?mg?TIMP-1抗體，再加入無(wú)水戊二醛至終濃度1%，37℃攪拌過(guò)夜，

d)??12000rpm，4℃，離心15min，棄上清，

e)??UCP沉淀物中加入10ml?pH=7.2?0.20M?PB，混勻，

f)??12000rpm，4℃，離心15min，棄上清，

g)?收集UCP沉淀物待用；

（3)?制備凍干結(jié)合墊?

a)??將50ml?UCP標(biāo)記物懸濁液，12000rpm，4℃，離心30min，棄上清，

b)??加入45ml的凍干液，pH=7.2?0.20M?PB，含2%BSA，3%蔗糖，

c)??將UCP標(biāo)記物懸濁液按5cm2/ml加于玻璃纖維上,

d)??真空凍干11h；

（4）裁剪結(jié)合墊；將凍干的結(jié)合墊裁剪成1cm寬的長(zhǎng)條；

（5）組裝試紙條；依次將硝酸纖維素膜、吸水紙、結(jié)合墊、樣品墊貼到底板上，切成4.0mm寬的紙條。