[發(fā)明專利]南極芽胞桿菌和嗜冷桿菌及混合殺菌劑及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210097025.9
• 申請日: 2012-03-15
• 公開（公告）號: CN102732445A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何培青;沈繼紅;李江;劉晨臨;林學(xué)政;陳昊;黃曉航
• 申請（專利權(quán)）人: 國家海洋局第一海洋研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/01;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種南極芽胞桿菌和嗜冷桿菌及混合殺菌劑，其特征在于是分別從南極海冰或海泥中分離獲得的海洋細菌，是兩種南極生防菌株，分子鑒定分別確認為芽孢桿菌屬(Bacillus)，命名為Bacillus?sp.107；嗜冷桿菌屬(Psychrobacter)，命名為Psychrobacter?sp.B-3。

2.如權(quán)利要求1所述的南極芽胞桿菌和嗜冷桿菌及混合殺菌劑，其特征在于所述的海洋細菌是南極芽孢桿菌和嗜冷桿菌，其生防菌株保存方法是采用試管斜面法，培養(yǎng)基：蛋白胨3-5g，酵母粉0.5-1g，瓊脂粉15-17g，陳海水120-200毫升，自來水800-880毫升，pH值7.0-7.2，在試管斜面上劃線接種生防菌株；南極芽孢桿菌Bacillus?sp.107的培養(yǎng)溫度為15-25℃，嗜冷桿菌Psychrobacter?sp.B-3的培養(yǎng)溫度10-15℃，培養(yǎng)24-36小時后，貯存于3-5℃。

3.一種專用于南極芽孢桿菌生防菌株的生防制劑的制備方法，其特征在于保存的生防菌株制備發(fā)酵種子液，是將試管斜面保存的Bacillus?sp.107生防菌株接種于種子培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的組分為：蛋白胨3-5g，酵母粉0.5-1g，陳海水120-200毫升，自來水800-880毫升，pH值7.0-7.2，于15-25℃，150轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24-48小時后進行深層發(fā)酵獲得發(fā)酵種子液。

4.一種專用于南極嗜冷桿菌生防菌株的生防制劑的制備方法，其特征在于保存的生防菌株制備發(fā)酵種子液，是將試管斜面保存的Psychrobacter?sp.B-3生防菌株接種于種子培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的組分為：蔗糖20-22.5g，豆粉8-10.5g，K₂HPO₄?0.1-0.2g，Na₂SO₄?0.05-0.1g，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.005-0.01g，CaCO₃1-2g，陳海水120-200毫升，自來水800-880毫升，pH值7.0-7.2，于10-15℃，150轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24-48小時后獲得發(fā)酵種子液。

5.如權(quán)利要求3所述的專用于南極芽孢桿菌生防菌株的生防制劑的制備方法，其特征在于制備的發(fā)酵種子液進行深層發(fā)酵，是在培養(yǎng)基：麩皮5-6g，酵母粉3g-4g，陳海水150毫升，自來水850毫升，滅菌后pH值為7.0-7.2條件下進行。100升發(fā)酵罐的加料量為70升，按以5％-7％質(zhì)量百分?jǐn)?shù)接種制備的Bacillus?sp.107種子液；罐內(nèi)溫度保持在25℃±1℃；罐內(nèi)壓力控制在0.02Pa；攪拌速度為220-250轉(zhuǎn)/分，通過空氣壓縮機向罐內(nèi)提供發(fā)酵過程中需要的氧氣；在培養(yǎng)基中加入300-350毫升豆油作為消泡劑，發(fā)酵96-120小時菌株數(shù)量可達10⁹個/毫升。

6.如權(quán)利要求4所述的專用于南極嗜冷桿菌生防菌株的生防制劑的制備方法，其特征在于制備的發(fā)酵種子液進行深層發(fā)酵，是在培養(yǎng)基：蔗糖40-45g，豆粉18-21g，K₂HPO₄?0.1-0.2g，Na₂SO₄?0.05-0.1g，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.005-0.01g，CaCO₃1-3g，陳海水1000毫升，100升發(fā)酵罐的加料量為70升，滅菌后pH值7.0-7.2；按5-7％質(zhì)量百分?jǐn)?shù)將Psychrobacter?sp.B-3種子液接種于發(fā)酵罐內(nèi)的深層發(fā)酵培養(yǎng)基，通過空氣壓縮機向罐內(nèi)通入壓縮空氣，以提供發(fā)酵過程中需要的氧氣，罐內(nèi)壓力控制在0.02Pa；發(fā)酵溫度利用外接低溫循環(huán)水控制，罐內(nèi)溫度保持在10±1℃；加入300-350毫升滅菌的豆油作為消泡劑來消除在攪拌過程中產(chǎn)生的氣泡，攪拌速度為220-250轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵120-144小時，胞外多糖產(chǎn)量可達4.5g/升。